Luminômetro

Informações básicas sobre luminômetros

Um Luminômetro (outras denominações: leitor de microplacas de luminescência) é um equipamento capaz de detectar os fótons de luz emitidos por reações químicas, bioquímicas ou enzimáticas em uma microplaca e quantificá-los. A detecção de luminescência não é uma medida absoluta, como a absorbância. A intensidade do sinal é geralmente relativa a outras medições ou a uma medição de referência feita por um instrumento (como na fluorescência).

Consequentemente, os luminômetros quantificam o sinal de luz emitido por uma amostra em Unidades Relativas de Luz (RLU).

Luminômetros são utilizados para diferentes aplicações em várias áreas, tais como cin~encis da vida em pesquisa universitária, escaneamento e descoberta de drogas, laboratórios clínicos, biologia sintética e monitoramento de água e alimentos.

O que é um Luminômetro?

Os luminômetros são instrumentos bastante simples, opticamente falando, quando comparados aos leitores de placas de fluorescência. Devido à natureza do sinal luminescente, os leitores de microplacas luminescentes não requerem uma fonte de luz de excitação, nem óptica para seleção de comprimento de onda de excitação (conforme necessário para detecção de absorção ou fluorescência). Requerem apenas uma câmara de leitura, um sistema óptico para trazer o sinal de luz da amostra para o detector, um detector (tubo fotomultiplicador, PMT) e possivelmente um sistema óptico para a seleção de comprimentos de onda luminescentes (emissão).

Se você está procurando um novo Luminômetro no mercado, há alguns fatores a serem levados em consideração, pois o desempenho do instrumento pode afetar significativamente a qualidade dos resultados do seu ensaio.

Sensibilidade

A luminescência é tipicamente gerada por uma reação bioquímica ou química e não requer luz de excitação. Consequentemente, geralmente oferece uma sensibilidade maior quando comparada à absorbância ou fluorescência. O sinal de fundo ou ruído inespecífico é extremamente limitado quando comparado à intensidade de fluorescência, pois não há processo de excitação que possa desencadear dispersão de luz ou autofluorescência tanto da amostra quanto da microplaca.

No entanto, um leitor de microplacas de luminescência com melhor sensibilidade fornecerá dados com uma estatística melhor, menor variabilidade entre replicações e um delta (distância) maior entre amostras que respondem e não respondem. Além disso, uma melhor sensibilidade permitirá reduzir a quantidade de reagentes e/ou amostras utilizadas para obter dados de boa qualidade e consequentemente reduzir custos.

Faixa dinâmica

As reações luminescentes em microplacas são geralmente baseadas na adição de um substrato aos poços para iniciar uma reação enzimática. Depois que a reação é iniciada e a quantidade de substrato é metabolizada pela enzima, a reação é esgotada e não pode ser reiniciada, a menos que novos reagentes e amostras sejam usados em uma microplaca nova. Consequentemente, é imperativo adquirir o sinal de todas as amostras que devem ser medidas de uma vez em uma microplaca com um luminômetro. Isso evita o risco de ter que repetir o ensaio e consumir mais reagentes.

Se você tiver amostras abrangendo uma ampla faixa de intensidades de sinal em uma única microplaca, pode ser difícil adquiri-las todas em uma medição com uma configuração. Amostras muito brilhantes podem saturar o detector de luminescência do leitor de microplacas. Amostras muito escuras podem não ser discerníveis dos brancos.

Ter uma ampla faixa dinâmica permite que seu Luminômetro adquira amostras altamente divergentes em uma corrida em uma única microplaca, evitando o desperdício de reagentes e tempo causado por várias medições de tentativa e erro para encontrar a proporção correta de tempo de integração / ganho / diluição. O recurso Enhanced Dynamic Range no PHERAstar FSX, no CLARIOstar Plus e no VANTAstar oferece o maior alcance dinâmico possível no mercado (8 décadas de concentração) e torna possível medir automaticamente sinais muito ou pouco intensos na mesma microplaca com uma única corrida – sem necessidade de ajuste.

Seleção de comprimento de onda

A capacidade de seleção de comprimento de onda (filtros ou monocromadores) em luminômetros não é obrigatória (como é para detecção de absorbância ou fluorescência), especialmente ao detectar ensaios luminescentes básicos. No entanto, dependendo da aplicação e especialmente para ensaios luminescentes com sinais múltiplos, a possibilidade de selecionar os comprimentos de onda de emissão é benéfica. Filtros ou monocromadores podem ser empregados para esta finalidade. Esta opção é útil ao desenvolver novos ensaios ou detectar múltiplos sinais luminescentes. Além disso, ajuda a otimizar os ensaios reduzindo o ruído de fundo.

Os filtros geralmente são mais sensíveis, enquanto os monocromadores oferecem mais flexibilidade. Uma exceção a esse paradigma é o sistema Monocromador de Filtro Variável Linear (LVF)^TM disponível no CLARIOstar Plus e no VANTAstar. Os monocromadores LVF têm desempenho semelhante a filtros e tornam o CLARIOstar Plus o leitor de microplacas baseado em monocromador mais sensível do mercado. Monocromadores LVF podem ser usados na detecção de intensidade de fluorescência e luminescência. Além disso, os monocromadores têm a capacidade de adquirir varreduras em modo de luminescência.

Além disso, a capacidade de detectar dois canais de emissão simultaneamente em um luminômetro é bastante benéfica para os ensaios BRET e NanoBRET. Esta opção reduz o tempo de medição pela metade e reduz a variabilidade dos dados. A detecção simultânea de emissão dupla (SDE) está disponível no LUMIstar Omega e no PHERAstar FSX.

Formatos de microplacas compatíveis

Normalmente, os ensaios básicos de luminescência são medidos em placas de 96 poços. No entanto, se você tiver várias amostras e/ou desejar economizar reagentes preciosos ou tempo, os formatos de 384 poços e 1536 poços também podem ser usados. Apenas certifique-se de que o Luminômetro de sua escolha também seja capaz de ler o formato de microplaca que planeja usar. Além disso, a detecção de absorbância, fluorescência e luminescência requer diferentes tipos de placas. A diafonia leve também deve ser considerada ao usar microplacas de alta densidade.

Interferência de sinais luminosos (Cross-talk)

A interferência de sinais (cross-talk) de luz ocorre quando, durante a medição de um poço, o sinal de luz do(s) poço(s) vizinho(s) em uma microplaca também é captado pelo detector. Isso leva a resultados adulterados. o Cross-talk é um específicamente relevante ao trabalhar com placas de alta densidade (384 poços e superiores). Existem duas maneiras pelas quais os sinais originados pelo cross-talk podem ser captados pelo detector, seja pela borda do do poço ou através das paredes da microplaca.

Luminômetros de excelência, como o CLARIOstar Plus, o VANTAstar e o PHERAstar FSX, podem compensar esse fator bloqueando fisicamente a luz proveniente dos poços vizinhos. Algoritmos específicos podem calcular a quantidade de luz transmitida através da parede de plástico e subtraí-la de suas amostras.

Reações de flash ou brilho

Ao procurar um Luminômetro, você deve considerar a natureza dos ensaios que deseja executar. De acordo com sua cinética, os ensaios luminescentes podem ser divididos em reações de flash e brilho. A luminescência do flash é uma reação de curta duração que emite um sinal muito brilhante por um período de tempo muito curto, geralmente segundos. A luminescência brilhante é bastante duradoura. A reação pode durar vários minutos, mas geralmente emite um sinal menos intenso.

Qualquer luminômetro pode detectar reações de brilho. Os ensaios flash requerem, em vez disso, o uso de injetores de reagentes. Ao pipetar manualmente os reagentes nos poços de uma microplaca, você corre o risco de perder o pico de sua reação, pois o sinal de curta duração já pode ter se esgotado antes de você detectá-lo. Nossos Luminômetros equipados com injetores de reagentes podem injetar e detectar automaticamente o sinal de um poço e depois passar para o próximo.

Os injetores de reagentes também são benéficos para ensaios Dual Luciferase Reporter (DLR). Aqui, a atividade de duas luciferases é medida sequencialmente a partir de uma única amostra por um luminômetro e relata a transcrição de um gene de interesse e um controle de transfecção. Ambos os ensaios podem ser concluídos em cerca de 4 segundos usando Luminômetros com injetores de reagente.

Nossos leitores de placas de luminescência

A detecção de luminescência pode ser realizada no Luminômetro dedicado LUMIstar^® Omega da BMG LABTECH e em leitores de microplacas multimodo, incluindo o PHERAstar^® FSX, CLARIOstar^® Plus, VANTAstar^TM e FLUOstar^® Omega.

Todos os nossos Luminômetros são certificados para ensaios Dual-Luciferase Reporter, utilizam PMT (tubo fotomultiplicador) de baixo ruído otimizado para luminescência e podem ser equipados com injetores de reagentes de alta precisão.

PHERAstar FSX

Leitor de placas HTS poderoso e mais sensível

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CLARIOstar Plus

O leitor de microplacas mais flexível para o desenvolvimento de ensaios

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VANTAstar

Leitor de microplacas flexível com processos de trabalho simplificados

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Omega Series

Série de leitores de microplacas simples e multi-modo atualizáveis

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Quais ensaios podem ser medidos por um Luminômetro?

Luminômetros como instrumentos monomodo ou multimodo (incluindo, por exemplo, detecção de absorbância e fluorescência) podem abranger uma ampla gama de ensaios, incluindo reações enzimáticas, gene Repórter Dual Luciferase (DLR), fluxo de cálcio luminescente e ELISAs quimioluminescentes.

Os luminômetros também são úteis para analisar a viabilidade celular, ensaios de citotoxicidade e apoptose, vias de sinalização e metabolismo. A contaminação por micoplasma nas células também pode ser medida por ensaios luminescentes.

Mesmo ensaios de proximidade ou interação proteína-proteína podem ser medidos por ensaios BRET e nanoBRET.

BRET (Bioluminescence Resonance Energy Transfer) é um ensaio de detecção de luminescência de repórter duplo baseado na transferência de energia de ressonância entre um doador bioluminescente e um aceitador fluorescente. Como o doador emite fótons por bioluminescência, a excitação por fluorescência é dispensável.

Exemplos para medições de luminescência:

A seguir, exemplos de medições de luminescência feitas em luminômetros BMG LABTECH:

Veja uma lista completa de notas de aplicação de luminescência.

Por que escolher um BMG LABTECH Leitores de placa de luminescência?

A BMG LABTECH é especializada na produção apenas de leitores de microplacas e traz mais de 30 anos de experiência em tecnologia de leitura de placas. Esse conhecimento fica visível nos resultados que nossos instrumentos entregam - o único fator que conta em seu laboratório! Os usuários do BMG LABTECH podem confiar para obter os melhores resultados em sensibilidade, velocidade e flexibilidade. Além disso, nossos leitores de microplacas multimodo são desenvolvidos para fornecer desempenho ideal por anos. Nossos instrumentos são desenvolvidos, produzidos e testados na Alemanha e são construídos para serem extremamente robustos e confiáveis.

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Devido à sua modularidade, todos os nossos leitores de placas de fluorescência podem ser equipados com diferentes modos de detecção e abrangem uma infinidade de aplicações. Recursos adicionais podem ser atualizados a qualquer momento. Isso lhe dá a chance de manter suas opções em aberto, mesmo que você não use todo o escopo do seu leitor de microplacas imediatamente.

Serviço e suporte completos
Nós nos esforçamos para fornecer a você o melhor atendimento ao cliente. Todos os representantes da área de vendas são especialistas técnicos altamente treinados, capazes de dar suporte a hardware, software e à maioria das questões de aplicação. Para as soluções de aplicações mais complexas, uma equipe dedicada de especialistas em aplicações também está disponível.

Pacote de software multiusuário
Todos os nossos instrumentos vêm com um pacote de software multiusuário que pode ser instalado em quantos computadores o usuário desejar, sem a necessidade de adquirir licenças. As atualizações de software para nossos leitores de microplacas são gratuitas nos primeiros 12 meses após a compra.