Lector de placas de luminiscencia

¿Qué tener en cuenta a la hora de elegir un Lector de Placas de Luminiscencia?

Si está buscando un nuevo lector de placas de luminiscencia, hay algunos factores que debe tener en cuenta, ya que el rendimiento del instrumento puede afectar significativamente la calidad de los resultados de su ensayo.

Sensibilidad

La luminiscencia generalmente se genera mediante una reacción bioquímica o química y no requiere luz de excitación. En consecuencia, generalmente ofrece una mayor sensibilidad en comparación con la absorbancia o a la fluorescencia. La señal de ruido o de fondo no específica es extremadamente limitada en comparación con la intensidad de la fluorescencia, ya que no existe un proceso de excitación que pueda desencadenar la dispersión de la luz o la autofluorescencia tanto de la muestra como de la microplaca.

Sin embargo, un lector de microplacas de luminiscencia con mejor sensibilidad entregará datos con mejores estadísticas, menos variabilidad entre repeticiones y un mayor delta (distancia) entre las muestras que respondieron y las que no respondieron. Además, una mejor sensibilidad le permitirá reducir la cantidad de reactivos y/o muestras utilizadas para lograr datos de buena calidad y, en consecuencia, reducir costos.

Gama dinámica

Las reacciones luminiscentes en microplacas generalmente se basan en la adición de un sustrato a los pocillos para iniciar una reacción enzimática. Una vez que se inicia la reacción y la enzima metaboliza la cantidad de sustrato, la reacción se agota y no se puede volver a iniciar, a menos que se utilicen nuevos reactivos y muestras en una microplaca nueva. En consecuencia, es imperativo adquirir la señal de todas las muestras que deben medirse a la vez en una microplaca con un lector de placas de luminiscencia. Esto evita el riesgo de tener que repetir el ensayo y consumir más reactivos.

Si tiene muestras que abarcan una amplia gama de intensidades de señal en una sola microplaca, puede ser difícil adquirirlas todas en una sola medición con una configuración. Las muestras muy brillantes pueden saturar el detector de luminiscencia del lector de microplacas. Las muestras muy tenues pueden no ser discernibles de los blancos.

Si tiene muestras que abarcan una amplia gama de intensidades de señal en una sola microplaca, puede ser difícil adquirirlas todas en una sola medición con una configuración. Las muestras muy brillantes pueden saturar el detector de luminiscencia del lector de microplacas. Las muestras muy tenues pueden no ser discernibles de los blancos.

Selección de longitud de onda

La capacidad de selección de longitud de onda (filtros o monocromadores) en los lectores de placas de luminiscencia no es obligatoria (como para la detección de absorbancia o fluorescencia), especialmente cuando se detectan ensayos luminiscentes básicos. Sin embargo, dependiendo de la aplicación y especialmente para ensayos luminiscentes con señales múltiples, la posibilidad de seleccionar las longitudes de onda de emisión es beneficiosa. Se pueden emplear filtros o monocromadores para este fin. Esta opción es útil cuando se desarrollan nuevos ensayos o se detectan múltiples señales luminiscentes. Además, ayuda a optimizar los ensayos al reducir el ruido de fondo.

Los filtros suelen ser más sensibles, mientras que los monocromadores ofrecen mayor flexibilidad. Una excepción a este paradigma es el sistema MonochromatorTM de filtro variable lineal (LVF) disponible en CLARIOstar Plus y VANTAstar. Los monocromadores LVF tienen un rendimiento similar al de un filtro y hacen que CLARIOstar Plus sea el lector de microplacas basado en monocromador más sensible del mercado. Los monocromadores LVF se pueden utilizar en la detección de intensidad de fluorescencia y luminiscencia. Además, los monocromadores tienen la capacidad de adquirir escaneos de luminiscencia.

Además, la capacidad de detectar dos canales de emisión simultáneamente en un lector de placas de luminiscencia es muy beneficiosa para los ensayos BRET y NanoBRET. Esta opción reduce a la mitad el tiempo de medición y reduce la variabilidad de los datos. La detección de emisión dual simultánea (SDE) está disponible en LUMIstar Omega y en PHERAstar FSX.

Formatos de microplacas compatibles

Comúnmente, los ensayos básicos de luminiscencia se miden en placas de 96 pocillos. Sin embargo, si tiene varias muestras y/o desea ahorrar valiosos reactivos o tiempo, también se pueden utilizar formatos de 384 pocillos y 1536 pocillos. Solo asegúrese de que el lector de placas de luminiscencia de su elección también sea capaz de leer el formato de microplaca que planea usar. Además, la detección de absorbancia, fluorescencia y luminiscencia requiere diferentes tipos de placas. También se debe tener en cuenta la diafonía ligera cuando se utilizan microplacas de alta densidad.

Diafonía ligera

La diafonía de luz ocurre cuando, durante la medición de un pozo, el detector también capta la señal de luz de los pozos vecinos en una microplaca. Esto conduce a resultados adulterados. La diafonía es específicamente un factor cuando se trabaja con placas de alta densidad (384 pocillos y más). Hay dos formas en que el detector puede captar la luz de diafonía, ya sea desde la parte superior del pocillo o a través del pared de plástico de la microplaca.

Los lectores de placas de luminiscencia de gama alta, como CLARIOstar Plus, VANTAstar y PHERAstar FSX, pueden compensar este factor al bloquear físicamente la luz que proviene de los pozos vecinos. Los algoritmos específicos pueden calcular la cantidad de luz transmitida a través de la pared de plástico y restarla de sus muestras.

Reacciones de destello o resplandor

Cuando busque un lector de placas de luminiscencia, debe considerar la naturaleza de los ensayos que desea ejecutar. De acuerdo con su cinética, los ensayos luminiscentes se pueden dividir en reacciones de destello y resplandor. La luminiscencia de flash es una reacción de corta duración que emite una señal muy brillante durante un período de tiempo muy corto, generalmente segundos. La luminiscencia del resplandor es bastante duradera. La reacción puede durar varios minutos, pero normalmente emite una señal menos intensa.

Cualquier lector de placas de luminiscencia puede detectar reacciones de brillo. En cambio, los ensayos flash requieren el uso de inyectores de reactivos. Al pipetear manualmente los reactivos en los pocillos de una microplaca, puede correr el riesgo de perder el pico de su reacción, ya que la señal de corta duración podría agotarse antes de que la detecte. Nuestros lectores de placas de luminiscencia equipados con inyectores de reactivos pueden inyectar y detectar automáticamente la señal de un pozo y luego pasar al siguiente.

Los inyectores de reactivos también son beneficiosos para los ensayos Dual Luciferase Reporter (DLR). Aquí, la actividad de dos luciferasas se mide secuencialmente a partir de una sola muestra mediante un lector de placas de luminiscencia e informa la transcripción de un gen de interés y un control de transfección. Ambos ensayos se pueden completar en unos 4 segundos utilizando lectores de placas de luminiscencia con inyectores de reactivos.

Nuestros lectores de placas de luminiscencia

La detección de luminiscencia se puede realizar en el lector de placas de luminiscencia LUMIstar® Omega dedicado de BMG LABTECH y lectores de microplacas multimodo, incluidos PHERAstar® FSX, CLARIOstar® Plus, VANTAstarTM y FLUOstar® Omega.

Todos nuestros lectores de placas de luminiscencia están certificados para los ensayos de reportero de luciferasa dual que utilizan PMT (tubo fotomultiplicador) de bajo ruido optimizado para luminiscencia y pueden equiparse con inyectores de reactivos de alta precisión.