PHERAstar FSX
Lector de placas HTS potente y sensible
Información básica sobre los lectores de placas de luminiscencia
Un lector de placas de luminiscencia (otros nombres: lector de microplacas de luminiscencia) es un equipo capaz de detectar los fotones de luz emitidos por reacciones químicas, bioquímicas o enzimáticas en una microplaca y cuantificarlos. La detección de luminiscencia no es una medida absoluta, como la absorbancia. La intensidad de la señal suele ser relativa a otras medidas oa una medida de referencia tomada por un instrumento (como en la fluorescencia). En consecuencia, los Lectores de Placas de Luminiscencia cuantifican la señal de luz emitida por una muestra en Unidades de Luz Relativas (RLU).
Los lectores de placas de luminiscencia se utilizan para diferentes aplicaciones en diversos campos, como la investigación académica en ciencias de la vida, el descubrimiento y la detección de fármacos, los laboratorios clínicos, la biología sintética y el control de la calidad del agua o los alimentos.
¿Qué es un lector de placas de luminiscencia?
Los lectores de placas de luminiscencia son instrumentos bastante simples, ópticamente hablando, en comparación con los lectores de placas de fluorescencia. Debido a la naturaleza de la señal luminiscente, los lectores de microplacas de luminiscencia no requieren una fuente de luz de excitación ni elementos ópticos para seleccionar la longitud de onda de excitación (como es necesario para la detección de absorbancia o fluorescencia). Solo requieren una cámara de lectura, un sistema óptico para llevar la señal de luz de la muestra al detector, un detector (tubo fotomultiplicador, PMT) y posiblemente un sistema óptico para la selección de longitudes de onda luminiscentes (emisión).
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¿Qué tener en cuenta a la hora de elegir un Lector de Placas de Luminiscencia?
Si está buscando un nuevo lector de placas de luminiscencia, hay algunos factores que debe tener en cuenta, ya que el rendimiento del instrumento puede afectar significativamente la calidad de los resultados de su ensayo.
Sensibilidad
La luminiscencia generalmente se genera mediante una reacción bioquímica o química y no requiere luz de excitación. En consecuencia, generalmente ofrece una mayor sensibilidad en comparación con la absorbancia o a la fluorescencia. La señal de ruido o de fondo no específica es extremadamente limitada en comparación con la intensidad de la fluorescencia, ya que no existe un proceso de excitación que pueda desencadenar la dispersión de la luz o la autofluorescencia tanto de la muestra como de la microplaca.
Sin embargo, un lector de microplacas de luminiscencia con mejor sensibilidad entregará datos con mejores estadísticas, menos variabilidad entre repeticiones y un mayor delta (distancia) entre las muestras que respondieron y las que no respondieron. Además, una mejor sensibilidad le permitirá reducir la cantidad de reactivos y/o muestras utilizadas para lograr datos de buena calidad y, en consecuencia, reducir costos.
Gama dinámica
Las reacciones luminiscentes en microplacas generalmente se basan en la adición de un sustrato a los pocillos para iniciar una reacción enzimática. Una vez que se inicia la reacción y la enzima metaboliza la cantidad de sustrato, la reacción se agota y no se puede volver a iniciar, a menos que se utilicen nuevos reactivos y muestras en una microplaca nueva. En consecuencia, es imperativo adquirir la señal de todas las muestras que deben medirse a la vez en una microplaca con un lector de placas de luminiscencia. Esto evita el riesgo de tener que repetir el ensayo y consumir más reactivos.
Si tiene muestras que abarcan una amplia gama de intensidades de señal en una sola microplaca, puede ser difícil adquirirlas todas en una sola medición con una configuración. Las muestras muy brillantes pueden saturar el detector de luminiscencia del lector de microplacas. Las muestras muy tenues pueden no ser discernibles de los blancos.
Si tiene muestras que abarcan una amplia gama de intensidades de señal en una sola microplaca, puede ser difícil adquirirlas todas en una sola medición con una configuración. Las muestras muy brillantes pueden saturar el detector de luminiscencia del lector de microplacas. Las muestras muy tenues pueden no ser discernibles de los blancos.
Selección de longitud de onda
La capacidad de selección de longitud de onda (filtros o monocromadores) en los lectores de placas de luminiscencia no es obligatoria (como para la detección de absorbancia o fluorescencia), especialmente cuando se detectan ensayos luminiscentes básicos. Sin embargo, dependiendo de la aplicación y especialmente para ensayos luminiscentes con señales múltiples, la posibilidad de seleccionar las longitudes de onda de emisión es beneficiosa. Se pueden emplear filtros o monocromadores para este fin. Esta opción es útil cuando se desarrollan nuevos ensayos o se detectan múltiples señales luminiscentes. Además, ayuda a optimizar los ensayos al reducir el ruido de fondo.
Los filtros suelen ser más sensibles, mientras que los monocromadores ofrecen mayor flexibilidad. Una excepción a este paradigma es el sistema MonochromatorTM de filtro variable lineal (LVF) disponible en CLARIOstar Plus y VANTAstar. Los monocromadores LVF tienen un rendimiento similar al de un filtro y hacen que CLARIOstar Plus sea el lector de microplacas basado en monocromador más sensible del mercado. Los monocromadores LVF se pueden utilizar en la detección de intensidad de fluorescencia y luminiscencia. Además, los monocromadores tienen la capacidad de adquirir escaneos de luminiscencia.
Además, la capacidad de detectar dos canales de emisión simultáneamente en un lector de placas de luminiscencia es muy beneficiosa para los ensayos BRET y NanoBRET. Esta opción reduce a la mitad el tiempo de medición y reduce la variabilidad de los datos. La detección de emisión dual simultánea (SDE) está disponible en LUMIstar Omega y en PHERAstar FSX.
Formatos de microplacas compatibles
Comúnmente, los ensayos básicos de luminiscencia se miden en placas de 96 pocillos. Sin embargo, si tiene varias muestras y/o desea ahorrar valiosos reactivos o tiempo, también se pueden utilizar formatos de 384 pocillos y 1536 pocillos. Solo asegúrese de que el lector de placas de luminiscencia de su elección también sea capaz de leer el formato de microplaca que planea usar. Además, la detección de absorbancia, fluorescencia y luminiscencia requiere diferentes tipos de placas. También se debe tener en cuenta la diafonía ligera cuando se utilizan microplacas de alta densidad.
Diafonía ligera
La diafonía de luz ocurre cuando, durante la medición de un pozo, el detector también capta la señal de luz de los pozos vecinos en una microplaca. Esto conduce a resultados adulterados. La diafonía es específicamente un factor cuando se trabaja con placas de alta densidad (384 pocillos y más). Hay dos formas en que el detector puede captar la luz de diafonía, ya sea desde la parte superior del pocillo o a través del pared de plástico de la microplaca.
Los lectores de placas de luminiscencia de gama alta, como CLARIOstar Plus, VANTAstar y PHERAstar FSX, pueden compensar este factor al bloquear físicamente la luz que proviene de los pozos vecinos. Los algoritmos específicos pueden calcular la cantidad de luz transmitida a través de la pared de plástico y restarla de sus muestras.
Reacciones de destello o resplandor
Cuando busque un lector de placas de luminiscencia, debe considerar la naturaleza de los ensayos que desea ejecutar. De acuerdo con su cinética, los ensayos luminiscentes se pueden dividir en reacciones de destello y resplandor. La luminiscencia de flash es una reacción de corta duración que emite una señal muy brillante durante un período de tiempo muy corto, generalmente segundos. La luminiscencia del resplandor es bastante duradera. La reacción puede durar varios minutos, pero normalmente emite una señal menos intensa.
Cualquier lector de placas de luminiscencia puede detectar reacciones de brillo. En cambio, los ensayos flash requieren el uso de inyectores de reactivos. Al pipetear manualmente los reactivos en los pocillos de una microplaca, puede correr el riesgo de perder el pico de su reacción, ya que la señal de corta duración podría agotarse antes de que la detecte. Nuestros lectores de placas de luminiscencia equipados con inyectores de reactivos pueden inyectar y detectar automáticamente la señal de un pozo y luego pasar al siguiente.
Los inyectores de reactivos también son beneficiosos para los ensayos Dual Luciferase Reporter (DLR). Aquí, la actividad de dos luciferasas se mide secuencialmente a partir de una sola muestra mediante un lector de placas de luminiscencia e informa la transcripción de un gen de interés y un control de transfección. Ambos ensayos se pueden completar en unos 4 segundos utilizando lectores de placas de luminiscencia con inyectores de reactivos.
Nuestros lectores de placas de luminiscencia
La detección de luminiscencia se puede realizar en el lector de placas de luminiscencia LUMIstar® Omega dedicado de BMG LABTECH y lectores de microplacas multimodo, incluidos PHERAstar® FSX, CLARIOstar® Plus, VANTAstarTM y FLUOstar® Omega.
Todos nuestros lectores de placas de luminiscencia están certificados para los ensayos de reportero de luciferasa dual que utilizan PMT (tubo fotomultiplicador) de bajo ruido optimizado para luminiscencia y pueden equiparse con inyectores de reactivos de alta precisión.
CLARIOstar Plus
El lector de placas más versátil para desarrollo de ensayos
VANTAstar
Lector de microplacas flexible con flujos de trabajo simplificados
Omega Series
Serie de lectores de microplacas de uno o varios modos actualizables
¿Qué ensayos se pueden medir con un lector de placas de luminiscencia?
Los lectores de placas de luminiscencia, como instrumentos monomodo o multimodo (incluidas, por ejemplo, la detección de absorbancia y fluorescencia), pueden cubrir una amplia gama de ensayos, incluidas reacciones enzimáticas, gen reportero de luciferasa dual (DLR), flujo de calcio luminiscente y ELISA quimioluminiscente.
Los lectores de placas de luminiscencia también son útiles para analizar ensayos de viabilidad celular, citotoxicidad y apoptosis, vías de señalización y metabolismo. La contaminación por micoplasma en las células también se puede medir mediante ensayos luminiscentes.
Incluso los ensayos de proximidad o interacción proteína-proteína pueden medirse mediante ensayos BRET y nanoBRET.
BRET (transferencia de energía por resonancia de bioluminiscencia) es un ensayo de detección de luminiscencia de doble indicador basado en la transferencia de energía de resonancia entre un donante bioluminiscente y un aceptor fluorescente. Como el donante emite fotones por bioluminiscencia, la excitación por fluorescencia es prescindible.
Ejemplos de mediciones de luminiscencia:
Los siguientes son ejemplos de mediciones de luminiscencia realizadas en lectores de placas de luminiscencia BMG LABTECH:
- AN 300: Verifying SPARCL performance on the CLARIOstar equipped for reading at time of injection
- AN 271: Dual Luciferase Reporter (DLR) assay certification
- AN 266: Promega's multiplexed cell viability and apoptosis assays
Vea una lista completa de notas de aplicación de luminiscencia.
¿Por qué elegir un lector de placas de luminiscencia BMG LABTECH?
BMG LABTECH is specialized in producing microplate readers only and brings 30 years of full expertise in microplate reading technology. This knowledge gets visible in the results that our instruments deliver - the only factor that counts in your lab! BMG LABTECH users can trust to receive best results in sensitivity, speed and flexibility. Moreover, our plate readers are developed to provide optimum performance for years. Our instruments are developed, produced and tested in Germany and are built to be extremely robust and reliable.
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Multi-user software package
All our instruments come with a multi-user software package that can be installed on as many computers as users requires, without the need to purchase licenses. Software updates for our microplate readers are of no charge within the first 12 month after purchase.