PHERAstar FSX
Il più potente e sensibile lettore di micropiastre HTS
Informazioni di base sui lettori di piastre a luminescenza
Un lettore di micropiastre a luminescenza (lettore di luminescenza, chiamato anche luminometro o lettore di piastre di luciferasi) è un'apparecchiatura in grado di rilevare i fotoni di luce emessi da reazioni chimiche, biochimiche o enzimatiche in una micropiastra e di quantificarli. La rilevazione della luminescenza non è una misura assoluta, come l'assorbanza. L'intensità del segnale è solitamente relativa ad altre misurazioni o a una misurazione di riferimento effettuata da uno strumento. Di conseguenza, i luminometri quantificano il segnale luminoso emesso da un campione in unità di luce relativa (RLU).
Un luminometro in grado di misurare i campioni presenti in una micropiastra viene solitamente definito lettore di micropiastre a luminescenza.
I lettori di micropiastre a luminescenza sono utilizzati per diverse applicazioni in vari campi, come la ricerca accademica nel campo delle scienze della vita, la scoperta e lo screening di farmaci, i laboratori clinici, la biologia sintetica e il monitoraggio della qualità degli alimenti o dell'acqua.
Che cos'è un lettore di piastre a luminescenza?
I lettori di micropiastre a luminescenza sono strumenti piuttosto semplici, dal punto di vista ottico, rispetto ai lettori di piastre a fluorescenza. A causa della natura del segnale o del test luminescente, i lettori di micropiastre a luminescenza non richiedono né una sorgente di luce di eccitazione, né un'ottica per la selezione della lunghezza d'onda di eccitazione (come necessario per la rilevazione dell'assorbanza o della fluorescenza). Richiedono solo una camera di lettura, un sistema ottico per portare il segnale luminoso dal campione al rilevatore, un rilevatore (tubo fotomoltiplicatore, PMT) ed eventualmente un sistema ottico per la selezione delle lunghezze d'onda di luminescenza (emissione).
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Se siete alla ricerca di un nuovo lettore di luminescenza, ci sono alcuni fattori da tenere in considerazione, poiché le prestazioni dello strumento possono influenzare in modo significativo la qualità dei risultati dei vostri test.
Sensibilità
Il segnale luminescente è tipicamente generato da una reazione biochimica o chimica e non richiede la luce di eccitazione. Di conseguenza, offre generalmente una sensibilità superiore rispetto all'assorbanza o alla fluorescenza. Il segnale di fondo o di rumore aspecifico è estremamente limitato rispetto all'intensità della fluorescenza, poiché non vi è alcun processo di eccitazione che possa innescare la dispersione della luce o l'autofluorescenza sia dal campione che dalla micropiastra.
Ciononostante, un lettore di micropiastre a luminescenza con un'elevata sensibilità fornirà dati di analisi con una statistica migliore, una minore variabilità tra le repliche e un delta (differenza) maggiore tra campioni rispondenti e non rispondenti. Inoltre, una maggiore sensibilità consente di ridurre la quantità di reagenti e/o campioni utilizzati per ottenere dati di buona qualità e, di conseguenza, di ridurre i costi.
Range dinamico
Le reazioni luminescenti nelle micropiastre si basano solitamente sull'aggiunta di un substrato ai pozzetti per avviare una reazione enzimatica. Una volta avviata la reazione e metabolizzata la quantità di substrato da parte dell'enzima, la reazione si esaurisce e non può essere riattivata, a meno che non si utilizzino nuovi reagenti e campioni in una nuova micropiastra. Di conseguenza, è indispensabile acquisire il segnale di tutti i campioni da misurare in una sola volta sulla micropiastra. In questo modo si evita il rischio di dover ripetere il test e di consumare altri reagenti.
Se su una singola micropiastra sono presenti campioni che coprono un'ampia gamma di intensità di segnale, può essere difficile acquisirli tutti in un'unica misurazione con un'unica impostazione. I segnali molto forti possono saturare il rivelatore del lettore di micropiastre. I segnali molto bassi possono essere indistinguibili dagli spazi vuoti.
Un ampio range dinamico consente al lettore di micropiastre a luminescenza di acquisire campioni molto diversi tra loro (campioni luminosi e campioni tenui) in un'unica corsa su una singola micropiastra, evitando lo spreco di reagenti e di tempo causato da molteplici misurazioni per tentativi ed errori per trovare il corretto rapporto tra diluizione e guadagno e tempo di integrazione. La funzione Enhanced Dynamic Range di PHERAstar FSX, CLARIOstar Plus e VANTAstar offre la più ampia gamma dinamica possibile sul mercato (8 decadi di concentrazione) e consente di misurare automaticamente segnali molto luminosi e fiochi nella stessa micropiastra con un'unica misura - facile da usare e senza bisogno di regolazioni.
Selezione della lunghezza d'onda
Questa capacità (con filtri o monocromatori) nei lettori di luminescenza non è obbligatoria (come per la rilevazione dell'assorbanza o della fluorescenza), soprattutto quando si tratta di un dosaggio di base. Tuttavia, a seconda dell'applicazione e soprattutto per i dosaggi a luminescenza con segnali multipli, la possibilità di selezionare l'emissione da un intervallo di lunghezze d'onda è vantaggiosa. A questo scopo si possono utilizzare filtri o monocromatori. Questa opzione è utile quando si sviluppano nuovi saggi o si rilevano più segnali luminescenti. Inoltre, contribuisce a ottimizzare i saggi riducendo il rumore di fondo.
I filtri sono solitamente più sensibili, mentre i monocromatori offrono maggiore flessibilità. Un'eccezione a questo paradigma è il sistema MonocromatoreTM a filtro variabile lineare (LVF) disponibile su CLARIOstar Plus e VANTAstar. I monocromatori LVF hanno prestazioni simili a quelle dei filtri e rendono il CLARIOstar Plus il lettore di micropiastre basato su monocromatore più sensibile sul mercato. I monocromatori LVF possono essere utilizzati per il rilevamento dell'intensità della fluorescenza e della luminescenza. Inoltre, i monocromatori hanno la capacità di acquisire scansioni e offrono una maggiore flessibilità per lo sviluppo dei test.
Trasferimento di energia di risonanza della bioluminescenza (BRET)
Inoltre, la possibilità di rilevare contemporaneamente due canali di emissione è molto vantaggiosa per i dosaggi BRET e NanoBRET. Questa opzione dimezza i tempi di misurazione e riduce la variabilità dei dati. La rilevazione simultanea a doppia emissione (SDE) è disponibile sul LUMIstar Omega e sul PHERAstar FSX.
Formati di micropiastra compatibili
Di solito, i test luminescenti di base vengono misurati in piastre da 96 pozzetti. Tuttavia, se si dispone di più campioni e/o si desidera risparmiare tempo o reagenti preziosi, è possibile utilizzare anche i formati a 384 e 1536 pozzetti, che richiedono meno µL come volume di riempimento. È sufficiente assicurarsi che lo strumento scelto sia in grado di leggere anche il formato di micropiastra che si intende utilizzare. Inoltre, il rilevamento dell'assorbanza, della fluorescenza e della luminescenza richiede tipi di piastre diversi. Quando si utilizzano micropiastre ad alta densità, si deve tenere conto anche del cross-talk della luce.
Cross-talk
Il light cross-talk è legato principalmente al rilevamento della luminescenza e si verifica quando, durante la misurazione di un pozzetto, il segnale luminoso dei pozzetti adiacenti di una micropiastra viene captato anche dal rilevatore. Questo porta a risultati alterati. Il cross-talk è un fattore specifico quando si lavora con piastre ad alta densità (384 pozzetti e oltre). La luce di cross-talk può essere captata dal rilevatore in due modi: dalla parte superiore del pozzetto o attraverso la parete di plastica della micropiastra.
I lettori di piastre di fascia alta, come CLARIOstar Plus, VANTAstar e PHERAstar FSX, possono compensare questo fattore bloccando fisicamente la luce proveniente dai pozzetti vicini. Algoritmi specifici sono in grado di calcolare la quantità di luce trasmessa attraverso la parete di plastica e di sottrarla ai campioni per fornire prestazioni più robuste.
Luminescenza glow e flash
Quando si cerca un lettore di micropiastre a luminescenza, è necessario considerare la natura dei test che si desidera eseguire. In base alla loro cinetica, i test di luminescenza possono essere suddivisi in reazioni flash e reazioni glow. Le reazioni flash hanno vita breve ed emettono un segnale molto luminoso per un periodo di tempo molto breve, in genere pochi secondi. Le reazioni glow sono piuttosto longeve. La reazione può durare diversi minuti, ma di solito emette un segnale meno intenso.
Qualsiasi lettore di micropiastre a luminescenza è in grado di rilevare le reazioni glow. I saggi flash richiedono invece l'uso di iniettori di reagenti. Pipettando manualmente i reagenti nei pozzetti di una micropiastra si corre il rischio di perdere il picco della reazione, poiché il segnale di breve durata potrebbe essere già esaurito prima di essere rilevato. I nostri strumenti dotati di iniettori di reagenti possono iniettare e rilevare automaticamente il segnale di un pozzetto e poi passare al successivo.
Gli iniettori di reagenti sono utili anche per i saggi Dual Luciferase Reporter (DLR). In questo caso, l'attività di due luciferasi viene misurata in sequenza da un singolo campione e riporta la trascrizione di un gene di interesse e di un controllo di trasfezione. Entrambi i saggi possono essere completati in circa 4 secondi utilizzando uno strumento con iniettori di reagenti.
I nostri lettori di piastre a luminescenza
La rilevazione in luminescenza può essere eseguita sul lettore di piastre a luminescenza dedicato di BMG LABTECH, LUMIstar® Omega, e sui lettori di micropiastre multimodali, tra cui PHERAstar® FSX, CLARIOstar® Plus, VANTAstar® e FLUOstar® Omega.
Tutti i nostri lettori di micropiastre a luminescenza sono certificati per i saggi Dual-Luciferase Reporter, utilizzano PMT (tubo fotomoltiplicatore) ottimizzati a basso rumore di fondo e possono essere dotati di iniettori di reagenti ad alta precisione.
CLARIOstar Plus
Il lettore di piastre più flessibile per lo sviluppo di saggi
VANTAstar
Lettore di micropiastre flessibile con flusso di lavoro semplificato
Serie Omega
Serie di lettori di micropiastre singoli e multimodali
Quali saggi di luminescenza possono essere misurati da un lettore di piastre?
Sia un lettore di micropiastre monomodale che multimodale (che include, ad esempio, il rilevamento dell'assorbanza e della fluorescenza TRF e AlphaScreen) può coprire un'ampia gamma di test, compresi tutti i test di bioluminescenza Promega, le reazioni enzimatiche, l'espressione genica mediante Dual Luciferase Reporter gene (DLR), il flusso di calcio luminescente e gli ELISA chemiluminescenti.
I lettori di micropiastre a luminescenza sono utili anche per analizzare saggi basati su cellule, come la vitalità cellulare (basata sull'ATP), la citotossicità e l'apoptosi, signalling pathways e il metabolismo. È inoltre possibile misurare la contaminazione da micoplasma nelle cellule.
Anche i saggi di prossimità o di interazione proteina-proteina possono essere misurati con i saggi BRET e nanoBRET.
Il BRET è un saggio di rilevamento a doppio reporter basato sul trasferimento di energia di risonanza tra un donatore bioluminescente e un accettore fluorescente. Poiché il donatore emette fotoni per bioluminescenza, l'eccitazione non è necessaria.
Esempi di misurazioni in luminescenza:
Di seguito sono riportati esempi di misurazioni della luminescenza effettuate sui lettori di piastre BMG LABTECH:
- AN372: Real-Time Cell Motility Tracking Increases the Throughput of Scratch Wound Assays
- AN316: CRISPR/Cas9 genome-edited cells express nanoBRET-donor that monitors protein interaction and trafficking
- AN 271: Dual Luciferase Reporter (DLR) assay certification
- AN 266: Promega's multiplexed cell viability and apoptosis assays
Consulta l'elenco completo delle note applicative sulla luminescenza.
Perché scegliere un lettore di micropiastre BMG LABTECH?
BMG LABTECH è specializzata nella produzione di lettori di micropiastre e vanta 30 anni di esperienza nella tecnologia di lettura delle micropiastre. Questa conoscenza è visibile nei risultati che i nostri strumenti forniscono - l'unico fattore che conta nel vostro laboratorio! Gli utenti di BMG LABTECH possono fidarsi di ricevere i migliori risultati in termini di sensibilità, velocità e flessibilità. Inoltre, i nostri lettori di piastre sono sviluppati per fornire prestazioni ottimali per anni. I nostri strumenti sono sviluppati, prodotti e testati in Germania e sono costruiti per essere estremamente robusti e affidabili.
Acquista solo ciò che ti serve
Grazie alla loro modularità, tutti i nostri lettori di piastre possono essere dotati di diverse modalità di rilevamento e coprire una moltitudine di applicazioni. Le funzioni aggiuntive possono essere aggiornate in qualsiasi momento. Questo vi dà la possibilità di mantenere aperte le vostre opzioni anche se non utilizzate subito l'intera portata del vostro lettore di micropiastre.
Assistenza e supporto a 360°
BMG LABTECH si impegna a fornire il miglior servizio di assistenza ai clienti. Se avete bisogno di assistenza, siamo a portata di telefono o di e-mail. Durante l'orario di lavoro, si parla immediatamente con una persona che sarà lieta di assistervi. Non ci sono sistemi telefonici automatizzati o code di attesa: i nostri scienziati, ingegneri e tecnici sono sempre pronti ad aiutarvi.
Pacchetto software integrato multiutente
Tutti i nostri strumenti sono dotati di un pacchetto software multiutente che può essere installato su tutti i computer necessari agli utenti, senza la necessità di acquistare licenze. Gli aggiornamenti del software per i nostri lettori di micropiastre sono gratuiti entro i primi 12 mesi dall'acquisto.