Lettori di micropiastre ad assorbanza

Un lettore di micropiastre ad assorbanza ( spettrofotometro per micropiastre ad assorbanza o lettore di assorbanza) è un'apparecchiatura in grado di rilevare e quantificare i fotoni di luce assorbiti/trasmessi da un campione liquido presente in una micropiastra, quando esposto alla luce a una specifica lunghezza d'onda.

A differenza dellafluorescenza e della luminescenza, la rilevazionedell'assorbanza è una misura assoluta quantificata in densità ottica (OD). La OD è definita come il rapporto logaritmico tra l'intensità della luce che colpisce una sonda e l'intensità della luce trasmessa attraverso di essa. In alternativa, è possibile utilizzare anche la trasmissione, ovvero la porzione di luce che passa attraverso il campione.

I lettori di micropiastre ad assorbanza, chiamati anche spettrofotometri, sono utilizzati per diverse applicazioni in vari campi, come la ricerca accademica nel campo delle scienze della vita, la scoperta e lo screening di farmaci, i laboratori clinici, la biologia sintetica e il monitoraggio della qualità degli alimenti o dell'acqua.

Rispetto a uno spettrofotometro standard, che misura una sonda alla volta in una cuvetta, un lettore di micropiastre può misurare lo stesso saggio di assorbanza con una maggiore produttività. I lettori di base sono generalmente compatibili con micropiastre a 96 pozzetti (lettori di micropiastre a 96 assorbanze). Gli strumenti di fascia alta possono misurare piastre da 384 o addirittura 1536 pozzetti.

Che cos'è un lettore di micropiastre ad assorbanza?

Un lettore di micropiastre ad assorbanza è uno strumento piuttosto complesso, dal punto di vista ottico. A causa della natura del segnale, questi lettori di micropiastre richiedono una sorgente di luce di eccitazione, un'ottica per la selezione delle lunghezze d'onda in ingresso, un rivelatore e un canale di riferimento.

Il campione viene illuminato da una luce di intensità specifica. L'intensità luminosa totale a cui è esposta la sonda è valutata da un canale di riferimento misurato a monte. Il rilevatore di luce si trova sul lato opposto della micropiastra rispetto alla sorgente luminosa. Misura quanta parte dell'intensità luminosa totale viene trasmessa attraverso la sonda e a quali lunghezze d'onda. La luce che non passa attraverso il rilevatore viene assorbita.

La quantità misurata di luce trasmessa può essere utilizzata per calcolare la concentrazione di una molecola di interesse, poiché la quantità di luce assorbita è correlata alla sua concentrazione (legge di Beer-Lambert). In alternativa, è possibile utilizzare una curva standard e pozzetti di concentrazioni sconosciute. In questo modo è possibile quantificare acidi nucleici, proteine e molecole specifiche (tramite ELISA).

I lettori di micropiastre ad assorbanza sono disponibili come lettori dedicati a sé stanti o come parte dilettori di micropiastre multimodali, se combinati con il rilevamento dell'intensità della fluorescenza e/o della luminescenza.

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Se sei alla ricerca di un nuovo lettore, sia esso dedicato all'assorbanza o multimodale (ad esempio, con fluorescenza e luminescenza), ci sono alcuni fattori da considerare. Infatti, le prestazioni dello strumento possono influenzare in modo significativo la qualità dei dati della ricerca.

Selezione della lunghezza d'onda

La capacità di selezionare le lunghezze d'onda è obbligatoria per un lettore di micropiastre ad assorbanza e dipende dal tipo di rivelatori utilizzati.

Comunemente vengono utilizzati due diversi tipi di rivelatori: Tubi foto-moltiplicatori (PMT) o spettrometri Charge Coupled Device (CCD).

I lettori di micropiastre basati su PMT richiedono un filtro ottico o un monocromatore tra la sorgente luminosa e il campione. I filtri ottici o i monocromatori possono essere utilizzati per selezionare la luce prima che venga inviata alla sonda. In questo modo, solo la luce alla lunghezza d'onda desiderata viene trasmessa, raggiunge il PMT e viene quantificata.

Per la scansione spettrale, i lettori di micropiastre basati su PMT richiedono un monocromatore. Questo seleziona l'intervallo di lunghezze d'onda desiderato e lo misura in sequenza con un movimento meccanico. Per misurazioni discrete multiple, sono necessari filtri diversi o una scansione monocromatica.

I lettori di micropiastre basati su spettrometri CCD non richiedono uno strumento di selezione. L'intera gamma di lunghezze d'onda della luce trasmessa attraverso la sonda viene acquisita e separata simultaneamente dal rilevatore CCD, a differenza di un monocromatore. In questo modo, è possibile acquisire spettri, singoli o multipli, di lunghezze d'onda discrete in un breve lasso di tempo. A differenza dei monocromatori, non è necessaria una scansione meccanica.

Se la tua applicazione richiede un'acquisizione spettrale, gli spettrometri CCD sono significativamente più veloci degli strumenti basati su monocromatori, in quanto non è necessaria una scansione meccanica dello spettro.

I nostri strumenti monomodali e multimodali sono dotati di uno spettrometro UV/vis per le misure di assorbanza. Questo acquisisce uno spettro completo da 220 a 1000 nm in meno di un secondo/pozzetto.

Formati di micropiastra compatibili

In genere, nelle applicazioni di scienze biologiche, i saggi di assorbanza di base come l'ELISA vengono misurati in micropiastre da 96 pozzetti. Tuttavia, se si dispone di più campioni e si desidera utilizzare piastre di microvolume (10-50 µL) per risparmiare reagenti o tempo, è possibile utilizzare anche i formati a 384 e 1536 pozzetti. Assicurarsi che il lettore di micropiastre di assorbanza scelto sia in grado di leggere anche il formato di micropiastra che si intende utilizzare.

Agitazione e incubazione

Quando si cerca un lettore di micropiastre ad assorbanza, è necessario considerare la natura della ricerca e delle applicazioni che si desidera eseguire. In generale, l'agitazione e l'incubazione sono due caratteristiche importanti. L'incubazione è fondamentale quando si eseguono saggi enzimatici a temperature stabili, ad esempio 37° C. Le opzioni di agitazione multiple consentono una miscelazione adeguata. Per applicazioni come la crescita cellulare di batteri o lieviti(OD₆₀₀), l'agitazione della piastra è fondamentale per ottenere una buona ossigenazione e di conseguenza una rapida replicazione cellulare.

Compatibilità con le cuvette

Tradizionalmente, le misure di assorbanza venivano eseguite in cuvette con un percorso normalizzato di 1 cm. Nelle micropiastre, la lunghezza del percorso cambia in base al volume e al formato della piastra. Se si misurano soluzioni acquose, la misura su micropiastra può essere normalizzata utilizzando la correzione della lunghezza del percorso del picco d'acqua. Se occasionalmente è necessario misurare in cuvette, assicurarsi che il lettore di micropiastre scelto disponga di una porta per cuvette integrata o di adattatori per la misurazione di cuvette in orizzontale, come la piastra LVis.

Software per la riduzione dei dati

In genere, il software che gestisce il lettore di micropiastre è una parte molto sottovalutata del pacchetto. Per alcuni lettori, il software controlla solo il processo di misurazione e fornisce un output di dati grezzi. In altri casi, può anche eseguire analisi complesse dei dati.

Un software completo, facile da usare e flessibile può rendere la vita più facile, semplificando il rilevamento e l'analisi dei dati in modo da poter ottenere il massimo dal lettore.

Le funzioni di calcolo più utili in modalità assorbanza includono la sottrazione automatica del bianco, il calcolo automatico delle concentrazioni in base alle curve standard per i saggi ELISA o alla legge di Beer-Lambert, i rapporti 260/280, le correzioni della lunghezza del percorso e le costanti enzimatiche come K_m e V_max.

Nel pacchetto software BMG LABTECH, i test più comuni hanno protocolli di esecuzione rapida predefiniti e modelli di analisi dedicati. Grazie a queste soluzioni dedicate, l'acquisizione e l'analisi vengono eseguite con un solo clic del mouse, consentendo ai ricercatori di eseguire gli esperimenti in modo rapido e semplice.

I nostri lettori di micropiastre ad assorbanza

La rilevazione dell'assorbanza può essere eseguita sui lettori di micropiastre multimodali PHERAstarFSX, CLARIOstarPlus, VANTAstar, FLUOstar e SPECTROstar Omega e sui lettori di piastre monomodali SPECTROstarNano.

Tutti i nostri lettori di micropiastre ad assorbanza sono dotati di una lampada flash allo xeno ad alta intensità e di uno spettrometro CCD.

BMG LABTECH è stata la prima azienda a utilizzare uno spettrometro UV-vis per le misure di assorbanza: illuminando la sonda con una lampada flash allo xeno ad alta potenza, il nostro spettrometro UV-visibile ultraveloce raccoglie l'intero spettro in un solo flash. Un intervallo di lunghezze d'onda da 220 a 1000 nm con una risoluzione di 1 - 10 nm viene acquisito in meno di 1 secondo per pozzetto.

In alternativa, sul FLUOstar Omega è disponibile la rilevazione dell'assorbanza basata su filtri (PMT).

PHERAstar FSX

Il più potente e sensibile lettore di piastre HTS

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CLARIOstar Plus

Il lettore di piastre più flessibile per lo sviluppo di test

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VANTAstar

Lettore di micropiastre flessibile con flussi di lavoro semplificati

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Serie Omega

Serie di lettori di micropiastre monomodali e multimodali aggiornabili

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SPECTROstar Nano

Lettore di piastre in assorbanza con porta per cuvette

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Quali test possono essere misurati da un lettore di micropiastre ad assorbanza?

L'assorbanza è una delle modalità di rilevamento più diffuse nelle applicazioni delle scienze biologiche. Di conseguenza, sul mercato è disponibile una moltitudine di kit e reagenti che un lettore di micropiastre ad assorbanza può utilizzare come strumento singolo o multimodale. Diversi saggi colorimetrici sono stati adattati alle piastre o sviluppati direttamente per l'uso in un lettore di micropiastre.

Una delle applicazioni più comuni è la quantificazione del DNA/RNA a 260 nm. È anche possibile quantificare una proteina specifica in soluzione, in genere mediante un saggio di immunosorbenza legato a un enzima (ELISA). Per la quantificazione delle proteine sono disponibili anche diversi metodi colorimetrici. Nell'articolo del nostro blog "Misurazione delle proteine: trovare il metodo adatto" troverete descrizioni dettagliate di saggi di quantificazione delle proteine come Bradford, BCA e suggerimenti per aiutarvi nella scelta.

Un'altra applicazione che il lettore di micropiastre ad assorbimento può misurare è la crescita cellulare nei batteri e nei lieviti, misurando la "densità ottica a 600 nm"(OD600) o la vitalità cellulare mediante saggi colorimetrici.

Esempi di misurazioni con i lettori di micropiastre ad assorbanza BMG LABTECH:

Di seguito sono riportati alcuni esempi di misure di assorbanza effettuate con i lettori di micropiastre BMG LABTECH:

Consulta l'elenco completo delle note applicative sull'assorbanza.

Perché scegliere un lettore di micropiastre ad assorbanza BMG LABTECH?

BMG LABTECH è specializzata nella produzione di lettori di micropiastre e vanta oltre 30 anni di esperienza nella tecnologia di lettura delle micropiastre. Questa conoscenza è visibile nei risultati che i nostri strumenti forniscono - l'unico fattore che conta nel vostro laboratorio! I nostri utenti possono fidarsi di ottenere i migliori risultati in termini di sensibilità, velocità e flessibilità. Inoltre, i nostri lettori di piastre monomodali e multimodali sono stati sviluppati per fornire prestazioni ottimali per anni. I nostri strumenti sono sviluppati, prodotti e testati in Germania e sono costruiti per essere estremamente robusti e affidabili.

Acquistate solo ciò che vi serve
Grazie alla loro modularità, tutti i nostri lettori di piastre multimodali possono essere dotati di diverse modalità di rilevamento e coprire una moltitudine di applicazioni. Le funzioni aggiuntive possono essere aggiornate. Questo vi dà la possibilità di mantenere aperte le vostre opzioni anche se non utilizzate subito l'intera portata del vostro lettore di micropiastre.

Assistenza e supporto a 360°
Ci impegniamo a fornirvi il miglior servizio e supporto al cliente. Se avete bisogno di assistenza, siamo a portata di telefono o di e-mail. Durante l'orario di lavoro, potrete parlare immediatamente con una persona che sarà lieta di assistervi. Non ci sono sistemi telefonici automatizzati o code di attesa. I nostri scienziati, ingegneri e tecnici sono sempre pronti ad aiutarvi.

Pacchetto software multiutente
Tutti i nostri strumenti sono dotati di un pacchetto software multiutente che può essere installato su tutti i computer necessari agli utenti, senza la necessità di acquistare licenze. Gli aggiornamenti del software per i nostri lettori di micropiastre sono gratuiti entro i primi 12 mesi dall'acquisto.

Lettore di micropiastre ad assorbanza

Informazioni di base sui lettori di micropiastre ad assorbanza

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