Lectores de absorbancia

Un lector de microplacas de absorbancia (lector de placas de absorbancia, espectrofotómetro de microplacas de absorbancia o lector de absorbancia) es un equipo capaz de detectar y cuantificar los fotones de luz absorbidos/transmitidos por una muestra líquida presente en una microplaca, cuando se expone a la luz en una longitud de onda específica.

A diferencia de la fluorescencia y la luminiscencia, la detección de absorbancia es una medida absoluta cuantificada en densidades ópticas (DO). La DO se define como la relación logarítmica entre la intensidad de la luz que incide sobre una muestra y la intensidad de la luz transmitida a través de ella. Alternativamente, también se puede utilizar la transmisión, la parte de la luz que pasa por la muestra.

Los lectores de absorbancia, también llamados lectores de placas espectrofotométricas o lectores de ELISA, se utilizan para diferentes aplicaciones en diversos campos, como la investigación académica en ciencias de la vida, el descubrimiento y la detección de fármacos, los laboratorios clínicos, la biología sintética y el control de la calidad de los alimentos o el agua.

En comparación con un espectrofotómetro estándar que mide una muestra cada vez en una cubeta, un lector de microplacas puede medir el mismo ensayo de absorbancia con un mayor rendimiento. Los lectores básicos suelen ser compatibles con microplacas de 96 pocillos (lectores de placas de 96 pocillos de absorbancia). Los instrumentos de gama alta pueden medir placas de 384 o incluso 1536 pocillos.

¿Qué es un lector de absorbancia?

Un lector de absorbancia es un instrumento bastante complejo desde el punto de vista óptico. Debido a la naturaleza de la señal, estos lectores de microplacas requieren una fuente de luz de excitación, ópticas para la selección de las longitudes de onda entrantes, un detector y un canal de referencia.

La muestra se ilumina con luz de una intensidad específica. La intensidad de luz total a la que está expuesta la muestra se evalúa mediante un canal de referencia medido previamente. El detector de luz está ubicado en el lado opuesto de la microplaca con respecto a la fuente de luz. Mide qué cantidad de intensidad lumínica total se transmite a través de la muestra y en qué longitudes de onda. La luz que no pasa al detector es absorbida.

La cantidad medida de luz transmitida se puede usar normalmente para calcular la concentración de una molécula de interés, ya que la cantidad de luz absorbida se relaciona con su concentración (ley de Beer-Lambert). Como alternativa, se puede utilizar una curva estándar y pocillos de concentraciones desconocidas. De esta manera se pueden cuantificar ácidos nucleicos, proteínas y moléculas específicas mediante ELISA.

Los lectores de absorbancia están disponibles como lectores independientes, dedicados o, como parte de lectores de microplacas multimodo, cuando se combinan con detección de intensidad de fluorescencia y/o luminiscencia.

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Si está buscando un nuevo lector de absorbancia (monomodo o multimodo), hay algunos factores que debe tener en cuenta, ya que el rendimiento del instrumento puede afectar significativamente la calidad de los datos de su investigación.

Selección de longitud de onda
La capacidad de seleccionar longitudes de onda es obligatoria para un lector de absorbancia y depende del tipo de detectores que se utilicen.

Normalmente se utilizan dos tipos diferentes de detectores: espectrómetros de tubos fotomultiplicadores (PMT) o dispositivos de carga acoplada (CCD).

El lector de microplacas basado en PMT requiere una herramienta de selección de longitud de onda entre la fuente de luz y el pocillo. Los filtros ópticos o monocromadores seleccionan la longitud de onda deseada antes de enviar la luz a la muestra. De esta manera, solo la luz en una longitud de onda deseada se transmite, llega al PMT y se cuantifica.

Para escanear espectros o un rango de longitudes de onda, el lector de microplacas basado en PMT requiere un monocromador. El monocromador selecciona las longitudes de onda deseadas y las mide secuencialmente con el movimiento mecánico. Para mediciones de múltiples longitudes de onda discretas, se requieren múltiples mediciones individuales con diferentes filtros o una exploración monocromática.

El lector de microplacas basado en espectrómetro CCD no requiere una herramienta de selección de longitud de onda. El espectrómetro separa las diferentes longitudes de onda presentes en la luz transmitida a través de la muestra a medida que se dirigen al detector CCD. Esto captura la intensidad de todas las longitudes de onda a la vez, a diferencia de un monocromador. De esta manera, se pueden adquirir espectros, longitudes de onda discretas únicas o múltiples en un corto período de tiempo, ya que no se requiere un escaneado mecánico como en los monocromadores.

Si su ensayo o aplicación necesita adquisición espectral, los espectrómetros CCD son significativamente más rápidos que los monocromadores, ya que no se requiere exploración espectral mecánica.

Formatos de microplacas compatibles
Los lectores monomodo y multimodo de BMG LABTECH están equipados con un espectrómetro UV/vis para mediciones de absorbancia. Esto captura un espectro de rango completo de 220 a 1000 nm en menos de un segundo/pocillo.

Agitación e incubación
Cuando busque un lector de absorbancia, debe considerar la naturaleza de su investigación y del ensayo que desea realizar. En general, la agitación y la incubación son dos características importantes. La incubación es de vital importancia cuando se realizan ensayos enzimáticos a temperaturas estables, por ejemplo, 37 °C. Las múltiples opciones de agitación permiten una mezcla adecuada. Para aplicaciones como ensayos de crecimiento celular en bacterias o levaduras (OD600), la agitación de la placa es crucial para una buena oxigenación y, en consecuencia, una rápida replicación celular.

Compatibilidad con cubetas
Tradicionalmente, las mediciones de absorbancia se realizaban en cubetas con una longitud de paso normalizada de 1 cm. En las microplacas, la longitud de la trayectoria cambia según el volumen y el formato de la placa. Si se miden soluciones acuosas, la medición de la microplaca se puede normalizar mediante la corrección de la longitud del trayecto del pico de agua. Si, a pesar de esta opción, para su investigación aún necesita ocasionalmente medir en cubetas, asegúrese de que el lector de microplacas de su elección tenga un puerto de cubetas integrado como el SPECTROstar Nano o adaptadores de placa para medir cubetas horizontalmente como el LVis Plate.

Software para reducción de datos
Generalmente, el software que ejecuta el lector de microplacas es una parte muy infravalorada del paquete. Para algunos lectores, el software solo controla el proceso de medición y proporciona una salida de datos de ensayo sin procesar. En otros casos, puede realizar análisis de datos complejos.

Un software integral, fácil de usar y flexible puede facilitarle la vida, simplificar la detección y el análisis de datos para que pueda aprovechar al máximo su instrumento.

Las funciones de cálculo más útiles para los ensayos de absorbancia incluyen la sustracción automática del blanco, el cálculo automático de concentraciones basado en curvas estándar para ensayos ELISA o en la ley de Beer-Lambert, relaciones 260/280, correcciones de longitud de trayectoria y constantes enzimáticas como Km y Vmax.

En el paquete de software BMG LABTECH, los ensayos más comunes tienen protocolos específicos de ensayos de ejecución rápida predefinidos y plantillas de análisis dedicadas. A través de estas soluciones dedicadas, la adquisición y el análisis se realizan con un solo clic del mouse, lo que permite a los investigadores realizar experimentos de forma rápida y sencilla.

Nuestros lectores de absorbancia

La detección de absorbancia se puede realizar en los lectores de microplacas multimodo PHERAstar FSX, CLARIOstar Plus, VANTAstar^TM, FLUOstar y SPECTROstar Omega, y en los lectores de placa modo único SPECTROstar Nano.

Todos nuestros lectores de absorbancia están equipados con una lámpara de destellos de xenón de alta intensidad y un espectrómetro CCD.

BMG LABTECH fue la primera empresa en emplear un espectrómetro UV/vis en lugar de filtros o monocromadores para la detección de absorbancia. Al iluminar la muestra con una lámpara de destello de xenón de alta potencia, el espectrómetro UV/vis ultrarrápido de BMG LABTECH recopila todo el espectro en lugar de una longitud de onda específica. Captura todas las longitcaudes de onda de 220 a 1000 nm a una resolución de 1 a 10 nm en menos de 1 segundo por pocillo.

Como alternativa, la detección de absorbancia basada en filtros (basada en PMT) está disponible en el FLUOstar Omega.

PHERAstar FSX

Lector de placas HTS potente y sensible

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CLARIOstar Plus

El lector de placas más versátil para desarrollo de ensayos

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VANTAstar

Lector de microplacas flexible con flujos de trabajo simplificados

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Omega Series

Serie de lectores de microplacas de uno o varios modos actualizables

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SPECTROstar Nano

Lector de placa de absorbancia con puerto de cubeta

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¿Qué ensayos se pueden medir con un lector de absorbancia?

La absorbancia es uno de los modos de detección más populares para aplicaciones de ciencias de la vida. En consecuencia, existe una multitud de kits y reactivos disponibles en el mercado para las más diferentes aplicaciones y tipos de ensayos que un lector de absorbancia puede cubrir como instrumento monomodo o multimodo. Se han adaptado varios ensayos colorimétricos a placas o se han desarrollado directamente para su uso en un lector de microplacas.

Una de las aplicaciones más comunes es la cuantificación de ADN/ARN a 260 nm. También es posible cuantificar una proteína específica en solución, normalmente mediante un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA). También se encuentran disponibles varios métodos colorimétricos para la cuantificación de proteínas. En nuestro artículo de blog "Medición de proteínas: encuentre un método adecuado" encontrará descripciones detalladas de ensayos de cuantificación de proteínas como Bradford, BCA y consejos para ayudarlo a elegir.

Otra aplicación que puede medir lector de absorbancia es el crecimiento celular en bacterias y levaduras al medir la "densidad óptica a 600 nm" (OD600) o la viabilidad celular mediante ensayos colorimétricos.

Ejemplos de aplicaciones con lectores de absorbancia BMG LABTECH:

Los siguientes son ejemplos de aplicaciones de absorbancia realizadas en lectores de microplacas BMG LABTECH:

Vea una lista completa de notas de aplicación de absorbancia.

¿Por qué elegir un lector de absorbancia BMG LABTECH?

select-science-trusted-reviews-02 BMG LABTECH es especialista, de manera exclusiva, en la producción de lectores de microplacas y cuenta con más de 30 años de experiencia en tecnología de lectura de placas. Este conocimiento es patente en los resultados que ofrecen nuestros instrumentos: ¡El único factor que cuenta en su laboratorio! Los usuarios de BMG LABTECH pueden confiar en obtener los mejores resultados en sensibilidad, velocidad y flexibilidad. Además, nuestros lectores de microplacas multimodo están desarrollados para proporcionar un óptimo rendimiento durante años. Nuestros instrumentos se diseñan, producen y prueban en Alemania y están fabricados para ser extremadamente robustos y fiables.

Compre solo lo que necesita
Debido a su modularidad, todos nuestros lectores de placas de fluorescencia pueden equiparse con diferentes modos de detección y cubrir multitud de aplicaciones. Las funciones adicionales se pueden actualizar en cualquier momento. Esto le da la oportunidad de mantener abiertas sus opciones incluso si no emplea inmediatamente todo el potencial de su lector de microplacas.

Servicio y soporte integral
Nos esforzamos por darle el mejor servicio al cliente. Todos los representantes del área de ventas son especialistas técnicos altamente capacitados capaces de dar soporte tanto en hardware como en software y en la mayoría de las preguntas sobre aplicaciones. Para las soluciones de aplicaciones más complejas, también está disponible un equipo de especialistas en aplicaciones específicas.

Paquete de software multiusuario
Todos nuestros instrumentos vienen con un paquete de software multiusuario que se puede instalar en tantas computadoras como los usuarios requieran, sin necesidad de comprar licencias adicionales. Las actualizaciones de software para nuestros lectores de microplacas son gratuitas durante los 12 meses posteriores a la compra.

Lectores de absorbancia

Información básica sobre los lectores de absorbancia