Que faut-il prendre en compte lors du choix d'un lecteur de microplaques par luminescence ?
PHERAstar FSX
Lecteur de microplaques HTS puissant et ultra-sensible
Informations de base sur les lecteurs de microplaques par luminescence
Un lecteur de microplaques par luminescence (autre nom : lecteur par luminescence) est un équipement capable de détecter les photons lumineux émis par des réactions chimiques, biochimiques ou enzymatiques dans une microplaque et de les quantifier. La détection de la luminescence n'est pas une mesure absolue, comme l'absorbance. L'intensité du signal est généralement relative à d'autres mesures ou à une mesure de référence prise par un instrument (comme dans le cas de la fluorescence). Par conséquent, les lecteurs de microplaques par luminescence quantifient le signal lumineux émis par un échantillon en unités lumineuses relatives (ULR).
Qu'est-ce qu'un lecteur de microplaques par luminescence ?
Les lecteurs de microplaques par luminescence sont des instruments assez simples, d'un point de vue optique, par rapport aux lecteurs de microplaques par fluorescence. En raison de la nature du signal luminescent, les lecteurs de microplaques par luminescence ne nécessitent ni source de lumière d'excitation, ni optique pour la sélection de la longueur d'onde d'excitation (comme cela est nécessaire pour la détection de l'absorbance ou de la fluorescence). Ils nécessitent simplement d'une chambre de lecture, un système optique pour acheminer le signal lumineux de l'échantillon vers le détecteur, d'un détecteur (tube photomultiplicateur, PMT) et éventuellement d'un système optique pour la sélection des longueurs d'onde de luminescence (émission).
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Si vous êtes à la recherche d'un nouveau lecteur de microplaques par luminescence, vous devez tenir compte de certains facteurs, car les performances de l'instrument peuvent affecter de manière significative la qualité des résultats de vos analyses.
Sensibilité
La luminescence est généralement générée par une réaction biochimique ou chimique et ne nécessite pas de lumière d'excitation. Par conséquent, elle offre généralement une plus grande sensibilité par rapport à l'absorbance ou à la fluorescence. Le bruit de fond ou signal parasite non spécifique est extrêmement limité par rapport à l'intensité de la fluorescence, car il n'existe pas de processus d'excitation susceptible de déclencher une diffusion de la lumière ou une autofluorescence à partir de l'échantillon et de la microplaque.
Néanmoins, un lecteur de microplaques par luminescence avec une meilleure sensibilité fournira des données avec de meilleures statistiques, moins de variabilité entre les réplicats, et un delta (distance) plus important entre les échantillons qui répondent et ceux qui ne répondent pas. En outre, une meilleure sensibilité vous permettra de réduire la quantité de réactifs et/ou d'échantillons utilisés pour obtenir des données de bonne qualité et, par conséquent, d'obtenir des résultats plus fiables.
Gamme dynamique
Les réactions luminescentes dans les microplaques sont généralement basées sur l'ajout d'un substrat dans les puits pour déclencher une réaction enzymatique. Une fois que la réaction est lancée et que la quantité de substrat est métabolisée par l'enzyme, la réaction est épuisée et ne peut plus être redéclenchée, à moins que de nouveaux réactifs et échantillons ne soient utilisés dans une nouvelle microplaque. Par conséquent, il est impératif d'acquérir le signal de tous les échantillons qui doivent être mesurés en une seule fois sur une microplaque avec un lecteur de microplaques par luminescence. Cela évite le risque de devoir répéter le test et de consommer davantage de réactifs.
Si vous avez des échantillons couvrant une large gamme d'intensités de signal sur une seule microplaque, il peut être difficile de tous les acquérir en une seule mesure avec un seul réglage. Des signaux très forts peuvent saturer le détecteur du lecteur de microplaques. Les signaux très faibles peuvent être indiscernables des blancs.
Une plage dynamique étendue permet à votre lecteur de microplaques par luminescence d'acquérir des échantillons très divergents en un seul passage sur une seule microplaque, évitant ainsi le gaspillage de réactifs et de temps causé par de multiples mesures par tâtonnement pour trouver le bon rapport dilution-gain-temps d'intégration. La fonction de plage dynamique améliorée (Enhanced Dynamic Range) des lecteurs PHERAstar FSX, CLARIOstar Plus et VANTAstar offre la plus grande plage dynamique possible sur le marché (8 décades de concentration) et permet de mesurer automatiquement des signaux très lumineux et très faibles dans la même microplaque en une seule mesure, ce qui est facile à utiliser et ne nécessite aucun réglage.
Sélection de la longueur d'onde
Une capacité de sélection des longueurs d'onde (avec filtres ou monochromateurs) dans les lecteurs de microplaques par luminescence n'est pas obligatoire (contrairement à la détection par absorbance ou fluorescence), en particulier lors de la détection de tests luminescents de base. Cependant, en fonction de l'application, et notamment pour les tests luminescents à signaux multiples, la possibilité de sélectionner les longueurs d'onde d'émission est avantageuse. Des filtres ou des monochromateurs peuvent être utilisés à cet effet. Cette option est utile lors du développement de nouveaux tests ou de la détection de signaux luminescents multiples. En outre, elle permet d'optimiser les tests en réduisant le bruit de fond.
Les filtres sont généralement plus sensibles, tandis que les monochromateurs offrent plus de flexibilité. Le système de monochromateur LVF (Linear Variable Filter)TM disponible sur les modèles CLARIOstar Plus et VANTAstar fait exception à cette règle. Les monochromateurs LVF offrent des performances similaires à celles des filtres et font du CLARIOstar Plus le lecteur de microplaques à monochromateur le plus sensible du marché. Les monochromateurs LVF peuvent être utilisés pour la détection de l'intensité de la fluorescence et de la luminescence. De plus, les monochromateurs ont la capacité d'acquérir des balayages et offrent une flexibilité supplémentaire pour le développement de tests.
En outre, la possibilité de détecter simultanément deux canaux d'émission sur un lecteur de microplaques par luminescence est très utile pour les tests BRET et NanoBRET. Cette option permet de diviser par deux le temps de mesure et de réduire la variabilité des données. La détection à double émission simultanée (SDE) est disponible sur le LUMIstar Omega et sur le PHERAstar FSX.
Formats de microplaques compatibles
En général, les tests de luminescence de base sont mesurés dans des plaques à 96 puits. Toutefois, si vous avez plusieurs échantillons et/ou si vous souhaitez économiser des réactifs ou du temps précieux, les formats 384 puits et 1536 puits peuvent également être utilisés. Assurez-vous simplement que le lecteur de microplaques par luminescence de votre choix est également capable de lire le format de microplaque que vous prévoyez d'utiliser. De plus, la détection par absorption, fluorescence et luminescence nécessite différents types de plaques. La diaphonie lumineuse doit également être prise en compte lors de l'utilisation de microplaques à haute densité.
Diaphonie lumineuse
La diaphonie se produit lorsque, pendant la mesure d'un puits, le signal lumineux du ou des puits voisins sur une microplaque est également capté par le détecteur. Cela conduit à des résultats faussés. La diaphonie est un facteur particulièrement important lorsque l'on travaille avec des microplaques à haute densité (384 puits et plus). La lumière de la diaphonie peut être captée par le détecteur de deux manières, soit par le haut du puits, soit par la paroi en plastique de la microplaque.
Les lecteurs de microplaques par luminescence haut de gamme tels que le CLARIOstar Plus, le VANTAstar et le PHERAstar FSX peuvent compenser ce facteur en bloquant physiquement la lumière provenant des puits voisins. Des algorithmes spécifiques peuvent calculer la quantité de lumière transmise à travers la paroi en plastique et la soustraire de vos échantillons afin d'obtenir des performances plus fiables.
Réactions de type éclat (flash) ou rayonnement (glow)
Lorsque vous recherchez un lecteur de microplaque par luminescence, vous devez tenir compte de la nature des tests que vous souhaitez réaliser. En fonction de leur cinétique, les tests luminescents peuvent être divisés en réactions à éclat et à rayonnement. Les réactions à éclat sont de courte durée et émettent un signal très lumineux pendant un laps de temps très court, généralement quelques secondes. Les réactions à rayonnement sont plutôt longues. La réaction peut durer plusieurs minutes, mais émet généralement un signal moins intense.
Tout lecteur de microplaque par luminescence peut détecter les réactions lumineuses. Les tests à éclat nécessitent plutôt l'utilisation d'injecteurs de réactifs. En pipettant manuellement les réactifs dans les puits d'une microplaque, vous risquez de perdre le pic de votre réaction, car le signal à courte durée de vie peut déjà être épuisé avant que vous ne le détectiez. Nos lecteurs de microplaques par luminescence équipés d'injecteurs de réactifs peuvent injecter et détecter automatiquement le signal d'un puits, puis passer au suivant.
Les injecteurs de réactifs sont également utiles pour les tests DLR (Dual Luciferase Reporter). Dans ce cas, l'activité de deux luciférases est mesurée séquentiellement à partir d'un seul échantillon et rend compte de la transcription d'un gène d'intérêt et d'un contrôle de transfection. Les deux tests peuvent être réalisés en environ 4 secondes à l'aide d'un instrument équipé d'injecteurs de réactifs.
Nos lecteurs de microplaques par luminescence
La détection de la luminescence peut être effectuée sur le lecteur de microplaques par luminescence dédié de BMG LABTECH, le LUMIstar® Omega, et sur des lecteurs de microplaques multimodes, notamment le PHERAstar® FSX, le CLARIOstar® Plus, le VANTAstar® et le FLUOstar® Omega.
Tous nos lecteurs de microplaques par luminescence sont certifiés pour les tests de double luciférase (Dual-Luciferase Reporter). Ils utilisent un PMT (tube photomultiplicateur) à faible bruit optimisé pour la luminescence et peuvent être équipés d'injecteurs de réactifs de haute précision.
CLARIOstar Plus
Lecteur de microplaques le plus flexible pour le développement de tests
VANTAstar
Lecteur de microplaques flexible avec flux de travail simplifié
Omega Series
Série améliorée de lecteurs de microplaques monomodes et multimodes
Apprécié et approuvé par :
Quels tests peuvent être mesurés par un lecteur de microplaques par luminescence ?
Les lecteurs de microplaques par luminescence, qu'il s'agisse d'instruments monomodes ou multimodes (incluant par exemple la détection de l'absorbance et de la fluorescence), peuvent couvrir une large gamme de tests, y compris les réactions enzymatiques, le gène DLR (Dual Luciferase Reporter), le flux de calcium luminescent et les tests ELISA par chimiluminescence.
Les lecteurs de microplaques par luminescence sont également utiles pour analyser les tests cellulaires tels que la viabilité cellulaire (basée sur l'ATP), la cytotoxicité et l'apoptose, les voies de signalisation et le métabolisme. La contamination des cellules par les mycoplasmes peut également être mesurée par des tests de luminescence.
Même les essais de proximité ou d'interaction protéine-protéine peuvent être mesurés par les essais BRET et nanoBRET.
Le BRET (Bioluminescence Resonance Energy Transfer) est un test de détection de luminescence à double rapporteur basé sur le transfert d'énergie de résonance entre un donneur bioluminescent et un accepteur fluorescent. Comme le donneur émet des photons par bioluminescence, l'excitation de la fluorescence est inutile.
Exemples de mesures de luminescence :
Voici des exemples de mesures de luminescence effectuées sur des lecteurs de microplaques par luminescence BMG LABTECH :
- AN 300: Verifying SPARCL performance on the CLARIOstar equipped for reading at time of injection
- AN 271: Dual Luciferase Reporter (DLR) assay certification
- AN 266: Promega's multiplexed cell viability and apoptosis assays
Voir la liste complète de la base de données d'applications sur la luminescence.
Pourquoi choisir un lecteur de microplaques par luminescence BMG LABTECH ?
BMG LABTECH est spécialisé dans la production de lecteurs de microplaques uniquement et apporte plus de 30 ans d'expertise complète dans la technologie de lecteurs de microplaques. Cette connaissance est visible dans les résultats que nos instruments fournissent - le seul facteur qui compte dans votre laboratoire ! Les utilisateurs de BMG LABTECH peuvent avoir confiance pour obtenir les meilleurs résultats en termes de sensibilité, de vitesse et de flexibilité. De plus, nos lecteurs de microplaques multimodes sont développés pour fournir des performances optimales pendant des années. Nos instruments sont développés, produits et testés en Allemagne et sont construits pour être extrêmement robustes et fiables.
Achetez uniquement ce dont vous avez besoin
Grâce à leur modularité, tous nos lecteurs de microplaques peuvent être équipés de différents modes de détection et couvrir une multitude d'applications. Des fonctionnalités supplémentaires peuvent être mises à niveau à tout moment. Vous avez ainsi la possibilité de garder vos options ouvertes, même si vous n'utilisez pas d'emblée toutes les possibilités de votre lecteur de microplaques.
Un service et un support complets
Nous nous efforçons de vous fournir le meilleur service clientèle possible. Tous les représentants des zones de vente sont des spécialistes techniques hautement qualifiés, capables de répondre aux questions relatives au matériel, aux logiciels et à la plupart des applications. Pour les solutions d'applications les plus complexes, une équipe de spécialistes des applications est également disponible.
Logiciels multi-utilisateurs
Tous nos instruments sont livrés avec un logiciel multi-utilisateurs qui peut être installé sur autant d'ordinateurs que les utilisateurs le souhaitent, sans qu'il soit nécessaire d'acheter des licences. Les mises à jour du logiciel de nos lecteurs de microplaques sont gratuites pendant les 12 premiers mois suivant l'achat.