Lecteurs de microplaques en absorbance

Un lecteur de microplaques par absorbance est un équipement capable de détecter et de quantifier les photons lumineux absorbés et transmis par un échantillon liquide présent dans une microplaque, lorsqu'il est exposé à la lumière à une longueur d'onde spécifique.

Contrairement à la fluorescence et à la luminescence, la détection de l'absorbance est une mesure absolue quantifiée en densités optiques (DO). La DO est définie comme le rapport logarithmique entre l'intensité de la lumière qui frappe une sonde et l'intensité de la lumière qui la traverse. On peut également utiliser la transmission, c'est-à-dire la partie de la lumière qui traverse l'échantillon.

Les lecteurs de microplaques par absorbance, également appelés lecteurs par absorbance, sont utilisés pour différentes applications dans divers domaines tels que la recherche universitaire, en sciences de la vie, la découverte et le criblage de médicaments, les laboratoires cliniques, la biologie synthétique et le contrôle de la qualité des aliments ou de l'eau.

Par rapport à un spectrophotomètre standard qui mesure un échantillon à la fois dans un puits, un lecteur de microplaques peut mesurer le même test d'absorbance avec un débit plus élevé. Les lecteurs de base sont généralement compatibles avec les microplaques à 96 puits (lecteurs de microplaques à 96 puits par absorbance). Les instruments haut de gamme peuvent mesurer des microplaques à 384 ou même 1536 puits.

Qu'est-ce qu'un lecteur de microplaques par absorbance ?

Un lecteur de microplaques par absorbance est un instrument assez complexe sur le plan optique. En raison de la nature du signal, ces lecteurs de microplaques nécessitent une source lumineuse d'excitation, des optiques pour la sélection des longueurs d'onde entrantes, un détecteur et un canal de référence.

L'échantillon est éclairé par une lumière d'une intensité spécifique. L'intensité lumineuse totale à laquelle l'échantillon est exposé est évaluée par un canal de référence mesuré en amont. Le détecteur de lumière est situé sur le côté opposé de la microplaque par rapport à la source de lumière. Il mesure combien de l'intensité lumineuse totale est transmise à travers l'échantillon et à quelles longueurs d'onde. La lumière qui ne passe pas à travers le détecteur est absorbée.

La quantité mesurée de lumière transmise peut être typiquement utilisée pour calculer la concentration d'une molécule d'intérêt, puisque la quantité de lumière absorbée est liée à sa concentration (loi de Beer-Lambert). Il est également possible d'utiliser une courbe standard et des puits de concentrations inconnues. De cette façon, les acides nucléiques, les protéines et les molécules spécifiques via ELISA peuvent être quantifiés.

Les lecteurs de microplaques par absorbance sont disponibles en tant que lecteurs autonomes dédiés ou, dans le cadre de lecteurs de microplaques multimodes, lorsqu'ils sont combinés à la détection de l'intensité de la fluorescence et/ou de la luminescence.

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Si vous êtes à la recherche d'un nouveau lecteur de microplaques par absorbance (monomode ou multimodes), il y a quelques facteurs à prendre en compte, car les performances de l'instrument peuvent affecter de manière significative la qualité de vos données de recherche.

Sélection de la longueur d'onde
La capacité de sélectionner les longueurs d'onde est obligatoire pour un lecteur de microplaques par absorbance et dépend du type de détecteurs utilisés.

Deux types de détecteurs différents sont couramment utilisés : les tubes photomultiplicateurs (PMT) ou les spectromètres à dispositif de couplage de charges (CCD).

Le lecteur de microplaques basé sur la PMT nécessite un outil de sélection de la longueur d'onde entre la source de lumière et le puits. Des filtres optiques ou des monochromateurs sélectionnent la longueur d'onde souhaitée avant que la lumière ne soit envoyée à l'échantillon. Ainsi, seule la lumière à la longueur d'onde souhaitée est transmise, atteint le PMT et est quantifiée.

Pour balayer les spectres ou une gamme de longueurs d'onde, le lecteur de microplaques basé sur la PMT nécessite un monochromateur. Le monochromateur sélectionne les longueurs d'onde souhaitées et les mesure séquentiellement par un mouvement mécanique. Pour les mesures de plusieurs longueurs d'onde discrètes, plusieurs mesures uniques avec différents filtres ou un balayage du monochromateur sont nécessaires.

Le lecteur de microplaques basé sur un spectromètre CCD ne nécessite pas d'outil de sélection de la longueur d'onde. Le spectromètre sépare les différentes longueurs d'onde présentes dans la lumière transmise par l'échantillon lorsque celle-ci est dirigée vers le détecteur CCD. Celui-ci capture l'intensité de toutes les longueurs d'onde en même temps, contrairement à un monochromateur. Ainsi, les spectres, d'une ou plusieurs longueurs d'onde discrètes, peuvent être acquis en peu de temps, car aucun balayage mécanique n'est nécessaire comme dans les monochromateurs.

Si votre test ou votre application nécessite une acquisition spectrale, les spectromètres CCD sont nettement plus rapides que les monochromateurs, car le balayage spectral mécanique n'est pas nécessaire.

Formats de microplaques compatibles
Les instruments monomodes et multimodes de BMG LABTECH sont équipés d'un spectromètre UV/vis pour les mesures d'absorbance. Celui-ci capture un spectre complet de 220 à 1000 nm en moins d'une seconde/puits.

Agitation et incubation
Lorsque vous recherchez un lecteur de microplaques par absorbance, vous devez tenir compte de la nature de vos recherches et du test que vous souhaitez effectuer. En général, l'agitation et l'incubation sont deux caractéristiques importantes. L'incubation est d'une importance capitale lorsque vous effectuez des tests enzymatiques à des températures stables, par exemple à 37 °C. Plusieurs options d'agitation permettent un mélange correct pour les applications telles que les cellules.

Compatibilité avec les puits
Traditionnellement, les mesures par absorbance étaient effectuées dans des cuvettes avec une longueur de trajet normalisée de 1 cm. Dans les microplaques, la longueur du trajet change en fonction du volume et du format de la microplaque. Si des solutions aqueuses sont mesurées, la mesure en microplaque peut être normalisée en utilisant la correction de la longueur du trajet du pic d'eau. Si, malgré cette option, vous devez occasionnellement effectuer des mesures en cuvettes pour vos recherches, assurez-vous que le lecteur de microplaques de votre choix dispose d'un port intégré pour cuvettes, comme le SPECTROstar Nano, ou d'adaptateurs de microplaque pour mesurer les cuvettes horizontalement, comme la microplaque LVis.

Logiciel de réduction des données
En général, le logiciel qui fait fonctionner le lecteur de microplaques est une partie très sous-estimée de l'ensemble. Pour certains lecteurs, le logiciel se contente de contrôler le processus de mesure et de fournir une sortie de données de dosage brutes. Dans d'autres cas, il peut effectuer une analyse complexe des données.

Un logiciel complet, facile à utiliser et flexible peut vous faciliter la vie, simplifier la détection et l'analyse des données afin que vous puissiez tirer le meilleur parti de votre instrument.

Les fonctions de calcul les plus utiles pour les tests d'absorbance comprennent la soustraction automatique du blanc, le calcul automatique des concentrations sur la base des courbes standard pour les tests ELISA ou de la loi de Beer-Lambert, les rapports 260/280, les corrections de la longueur du trajet et les constantes enzymatiques telles que K_m et V_max.

Sur le progiciel BMG LABTECH, les tests les plus courants disposent de protocoles prédéfinis spécifiques à des tests rapides et de modèles d'analyse dédiés. Grâce à ces solutions dédiées, l'acquisition et l'analyse s'effectuent en un seul clic de souris, permettant aux chercheurs de réaliser des expériences rapidement et facilement.

Nos lecteurs de microplaques par absorbance

La détection de l'absorbance peut être effectuée sur les lecteurs de microplaques multimodes PHERAstar FSX, CLARIOstar Plus, VANTAstar, FLUOstar et SPECTROstar Omega, et sur les lecteurs de microplaques monomodes SPECTROstar Nano.

Tous nos lecteurs de microplaques par absorbance sont équipés d'une lampe flash au xénon à haute intensité et d'un spectromètre CCD.

BMG LABTECH a été la première société à utiliser un spectromètre UV/vis au lieu de filtres ou de monochromateurs pour la détection de l'absorbance. Lorsque l'échantillon est éclairé par une lampe flash au xénon de forte puissance, le spectromètre UV/vis ultra-rapide de BMG LABTECH recueille la totalité du spectre au lieu d'une longueur d'onde spécifique. Il capte toutes les longueurs d'onde de 220 à 1000 nm à une résolution de 1-10 nm en moins de 1 seconde par puits.

La détection de l'absorbance par filtre (basée sur la PMT) est également disponible sur le FLUOstar Omega.

PHERAstar FSX

Lecteur de microplaques HTS puissant et ultra-sensible

CLARIOstar Plus

Lecteur de microplaques le plus flexible pour le développement de tests

VANTAstar

Lecteur de microplaques flexible avec flux de travail simplifiés

Omega Series

Série améliorée de lecteurs de microplaques monomodes et multimodes

SPECTROstar Nano

Lecteur de microplaques par absorbance avec port pour cuvette

Quels tests peuvent être mesurés par un lecteur de microplaques par absorbance ?

L'absorbance est l'un des modes de détection les plus populaires pour les applications des sciences de la vie. Par conséquent, il existe une multitude de kits et de réactifs disponibles sur le marché pour les applications et les types de tests les plus divers qu'un lecteur de microplaques par absorption peut couvrir en tant qu'instrument monomode ou multimodes. Plusieurs tests colorimétriques ont été adaptés à des microplaques ou directement développés pour être utilisés dans un lecteur de microplaques.

L'une des applications les plus courantes est la quantification de l'ADN/ARN à 260 nm. Il est également possible de quantifier une protéine spécifique en solution, généralement par dosage immuno-enzymatique (ELISA). Plusieurs méthodes colorimétriques sont également disponibles pour la quantification des protéines. Dans l'article de notre blog « Mesure des protéines : trouver une méthode adaptée », vous trouverez des descriptions détaillées des méthodes suivantes : Bradford, BCA et des conseils pour vous aider à choisir.

Une autre application que le lecteur de microplaques par absorbance peut mesurer est la croissance cellulaire chez les bactéries et les levures en mesurant la « densité optique à 600 nm » (DO600) ou la viabilité cellulaire par des tests colorimétriques.

Exemples de mesures effectuées avec les lecteurs de microplaques par absorbance BMG LABTECH :

Voici des exemples de mesures par absorbance effectuées sur des lecteurs de microplaques BMG LABTECH :

AN 303: Detection of plant-synthesized nanoparticles and their antibacterial capacity

AN 299: Absorbance-based methods for protein quantification on BMG LABTECH instruments

AN 272: Overview of ELISA assays and NADH/NADPH conversion detection

Voir la liste complète de la base de données d'applications sur l'absorbance.

Pourquoi choisir un lecteur de microplaques par absorbance BMG LABTECH ?

select-science-trusted-reviews-02 BMG LABTECH est spécialisé dans la production de lecteurs de microplaques uniquement et apporte plus de 30 ans d'expertise complète dans la technologie de lecteurs de microplaques. Cette connaissance est visible dans les résultats que nos instruments fournissent - le seul facteur qui compte dans votre laboratoire ! Les utilisateurs de BMG LABTECH peuvent avoir confiance pour obtenir les meilleurs résultats en termes de sensibilité, de vitesse et de flexibilité. De plus, nos lecteurs de microplaques multimodes sont développés pour fournir des performances optimales pendant des années. Nos instruments sont développés, produits et testés en Allemagne et sont construits pour être extrêmement robustes et fiables.

Achetez uniquement ce dont vous avez besoin
Grâce à leur modularité, tous nos lecteurs de microplaques peuvent être équipés de différents modes de détection et couvrir une multitude d'applications. Des fonctionnalités supplémentaires peuvent être mises à niveau à tout moment. Vous avez ainsi la possibilité de garder vos options ouvertes, même si vous n'utilisez pas d'emblée toutes les possibilités de votre lecteur de microplaques.

Un service et un support complets
Nous nous efforçons de vous fournir le meilleur service clientèle possible. Tous les représentants des zones de vente sont des spécialistes techniques hautement qualifiés, capables de répondre aux questions relatives au matériel, aux logiciels et à la plupart des applications. Pour les solutions d'applications les plus complexes, une équipe de spécialistes des applications est également disponible.

Logiciels multi-utilisateurs
Tous nos instruments sont livrés avec un logiciel multi-utilisateurs qui peut être installé sur autant d'ordinateurs que les utilisateurs le souhaitent, sans qu'il soit nécessaire d'acheter des licences. Les mises à jour du logiciel de nos lecteurs de microplaques sont gratuites pendant les 12 premiers mois suivant l'achat.

Lecteur de microplaques par absorbance

Informations de base sur les lecteurs de microplaques par absorbance

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Qu'est-ce qu'un lecteur de microplaques par absorbance ?

Que faut-il prendre en compte lors du choix d'un lecteur de microplaques par absorbance ?