Informations de base sur les néphélomètres
Un néphélomètre est un instrument dédié à la mesure de la turbidité ou de l'opacité d'un échantillon. La turbidité est généralement causée par la présence de particules insolubles en suspension dans un liquide ou un gaz. Un néphélomètre est utilisé pour mesurer la diffusion de la lumière (lumière réfléchie par les particules dans un échantillon), et non l'atténuation de la lumière (absorbance) causée par la turbidité.
Les lecteurs de microplaques néphélométriques mesurent les particules insolubles présentes dans les solutions liquides dans le puits d'une microplaque. La solution dans le puits est frappée par un faisceau lumineux perpendiculaire au plan de la microplaque. Les particules en suspension dans la solution vont disperser ce faisceau lumineux. Dans le néphélomètre, la lumière diffusée est collectée par un détecteur placé sur un côté à 90° de la source lumineuse.
La densité des particules est calculée en fonction de la diffusion de la lumière. Dans une certaine mesure, la diffusion pour une densité donnée de particules dépend des propriétés spécifiques des particules telles que leur taille, leur couleur et leur forme.
Les lecteurs de microplaques néphélométriques sont des instruments principalement utilisés pour surveiller la turbidité et la présence de particules dans divers domaines, tels que la découverte et le criblage de médicaments, la recherche universitaire en sciences de la vie et la surveillance de la qualité de l'eau. Dans les tests de qualité de l'eau, les instruments de diffusion sont également appelés turbidimètres.
Il existe une grande variété d'instruments sur le marché pour différentes applications de diffusion ou de turbidité. Les différences entre les instruments dépendent principalement de la position et de l'angle entre la source de lumière et le détecteur.
Une partie de la néphélométrie, mais qui ne concerne pas les lecteurs de microplaques néphélométriques, est la mesure de la diffusion des aérosols (par exemple, la pollution de l'air par la poussière), ou l'étude des atmosphères planétaires à l'aide de néphélomètres en phase gazeuse.
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Qu'est-ce qu'un néphélomètre ?
Un néphélomètre est un instrument qui contient une source lumineuse, un détecteur disposé à angle droit par rapport au faisceau lumineux et, entre les deux, un collecteur optique de lumière diffusée. Les néphélomètres sont des instruments spécialisés qui ne peuvent détecter que la diffusion et ne sont disponibles que sous forme de lecteurs de microplaques autonomes.
Sur le NEPHELOstar Plus de BMG LABTECH, une diode laser (à 635 nm) avec un faisceau hautement collimaté est utilisée comme source lumineuse à haute intensité. Le faisceau laser traverse le puits d'échantillon. S'il n'y a pas de particules diffusant la lumière, celle-ci passe directement à travers et aucun signal n'est généré. Si des particules sont présentes dans l'échantillon, la lumière est dispersée dans un collecteur de lumière diffusée appelé sphère d'Ulbricht. La lumière est alors réfléchie à l'intérieur de la sphère et finalement détectée par la photodiode du néphélomètre.
Dans les solutions liquides, la relation entre la concentration des particules diffusantes et l'intensité de la lumière diffusée est linéaire sur une large gamme de concentrations. Ainsi, un néphélomètre peut être utilisé pour mesurer la concentration de particules via la détection de la diffusion de la lumière. La concentration d'un échantillon résulte donc de l'intensité de la diffusion produite par ses particules. Cette quantité dépend de la nature (taille, couleur, forme, réflectivité) des particules.
L'unité de turbidité, mesurée à l'aide d'un néphélomètre ou d'un turbidimètre calibré pour la surveillance environnementale, est l'unité de turbidité néphélométrique (UTN). Cependant, la mesure des données de turbidité à l'aide d'un néphélomètre calibré est un processus long, en plusieurs étapes, qui nécessite de grands volumes d'échantillons.
Dans la base de données d'applications « Amélioration du débit pour l'évaluation des unités de turbidité néphélométrique (UTN) à l'aide du NEPHELOstar Plus », notre néphélomètre offre un débit plus élevé et une approche simplifiée et à faible volume pour la collecte de données UTN. Les données exprimées en UNR (unités de néphélométrie relative) collectées sur le NEPHELOstar Plus sont comparées aux résultats UTN obtenus avec un instrument conventionnel.
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Que faut-il prendre en compte lors du choix d'un néphélomètre ?
Si vous êtes à la recherche d'un néphélomètre ou d'un turbidimètre, il y a quelques facteurs à prendre en compte, car les performances peuvent affecter de manière significative la qualité de vos données de recherche.
Néphélométrie ou turbidimétrie
La diffusion peut être mesurée à la fois par néphélométrie et par turbidimétrie. Bien que ces deux termes soient parfois utilisés comme synonymes, ils ne le sont pas techniquement, comme mentionné ci-dessus. La turbidimétrie est essentiellement une mesure d'absorbance et peut être effectuée sur un lecteur de microplaques par absorbance (turbidimètre). Pour la mesure de la néphélométrie (diffusion directe), un turbidimètre dédié est nécessaire.
Lors du développement d'une méthode de diffusion, le choix de l'instrument entre le néphélomètre et le turbidimètre est déterminé par deux facteurs. Le facteur le plus important est la sensibilité. Si l'échantillon contient une faible concentration de particules diffusantes, alors un néphélomètre est le meilleur choix. Un turbidimètre est un choix approprié lorsque les échantillons ont une forte concentration de particules diffusantes. Sur le NEPHELOstar Plus, les particules insolubles légèrement diffusées sont détectées à des angles d'incidence allant jusqu'à 80°. Cela rend ce néphélomètre environ trente fois plus sensible que les lecteurs par absorbance traditionnels, mesurant la réduction de la lumière directe traversant un puits d'échantillon.
Deuxièmement, il faut tenir compte de la taille des particules diffusées. En général, les néphélomètres sont mieux adaptés pour mesurer la diffusion de petites particules (< 1 µm), car l'intensité de la lumière diffusée à 90° augmente. La taille des particules est moins importante pour les turbidimètres, car c'est la diminution de la lumière transmise qui est mesurée.
Flexibilité
Bien qu'un néphélomètre soit un instrument à usage unique, il faut tout de même tenir compte de sa flexibilité. Cela concerne principalement le faisceau lumineux, car il joue un rôle majeur dans la mesure de la diffusion. Une caractéristique exclusive du NEPHELOstar Plus est le réglage de l'intensité et du diamètre du faisceau de la source de lumière laser.
Dans un néphélomètre, la possibilité de régler l'intensité du faisceau laser améliore la sensibilité et fournit les meilleures performances. Avec une largeur de faisceau étroite, les effets de surface du liquide tels qu'un fort ménisque sont réduits. De plus, cela permet de meilleures performances dans les microplaques à haute densité jusqu'à 384 puits.
En fonction du test, un contrôle précis de la température, des capacités d'agitation multimodes et un contrôle atmosphérique ou un évent de gaz peuvent être bénéfiques.
Formats de microplaques compatibles
Les tests néphélométriques sont généralement mesurés dans des microplaques de 96 puits. Toutefois, si vous avez plusieurs échantillons et/ou si vous souhaitez économiser des réactifs ou du temps précieux, vous pouvez également utiliser des microplaques à 384 puits. Comme la diffusion peut également être causée par la poussière, la saleté ou les rayures sur le fond d'un puits, les microplaques utilisées pour la néphélométrie doivent être traitées avec un soin extrême.
Injecteurs de réactifs
Selon la nature du test que vous souhaitez réaliser, la disponibilité d'injecteurs de réactifs sur un néphélomètre peut être bénéfique. En pipettant manuellement les réactifs dans les puits, vous risquez de perdre des données importantes sur votre réaction. En particulier pour les réactions rapides, l'événement que vous recherchez peut déjà avoir disparu avant que le néphélomètre ne puisse le détecter.
Notre néphélomètre
La détection basée sur la néphélométrie peut être effectuée sur le NEPHELOstar Plus, le seul néphélomètre à microplaques au monde fonctionnant au laser. Le NEPHELOstar Plus utilise un laser spécifique dont l'intensité et le diamètre sont réglables comme source de lumière et une sphère d'Ulbricht pour collecter la lumière diffusée avec un angle allant jusqu'à 80 degrés. Grâce à ces caractéristiques, ce néphélomètre est capable de surpasser les simples mesures de turbidimétrie.
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Quels tests peuvent être mesurés par un néphélomètre ?
Dans les sciences de la vie, les néphélomètres sont principalement utilisés dans les laboratoires pharmaceutiques pour tester la solubilité des médicaments, ainsi que dans les criblages automatisés. Dans les laboratoires de biochimie, les principales applications d'un néphélomètre comprennent l'interaction protéine-protéine, l'agrégation des protéines et les études de polymérisation. En immunologie, la détection néphélométrique trouve sa principale application dans le développement de nouveaux anticorps et l'analyse de leur capacité de liaison aux antigènes.
La flexibilité et les performances du NEPHELOstar Plus permettent d'adapter plus d'applications que jamais à la néphélométrie laser sur microplaques. Celles-ci incluent également les essais de floculation et la cinétique de croissance bactérienne et fongique.
Dépistage automatisé de la solubilité des médicaments
La détermination de la solubilité des composés aqueux est devenue une mesure essentielle de l'étape initiale du processus de découverte de médicaments. Cette mesure, qui vise à éviter les cribles ADME longs et coûteux de composés peu solubles, peut être effectuée à haut débit sur un néphélomètre. Il a été démontré que la méthode de diffusion produit des résultats équivalents à ceux obtenus par une méthode HPLC et qu'elle n'est pas affectée par les solutions colorées.
Cinétique de la croissance microbienne
Le suivi néphélométrique en continu des changements de diffusion peut être utilisé pour tester les médicaments anti-microbiens et leurs effets sur la cinétique de croissance microbienne. Parmi les différents paramètres des courbes de croissance, la durée de la phase de latence est fortement affectée par la présence de médicaments anti-microbiens. Cette partie précoce de la courbe de croissance peut être surveillée plus précisément en utilisant le NEPHELOstar Plus au lieu d'un photomètre traditionnel.
Quantification des protéines
En chimie clinique, les tests immuno-phélométriques sont utilisés pour déterminer la concentration des immunoglobulines sériques (IgA, IgG, lgM), des composants du complément (C3, C4), des protéines réactives de phase aiguë (CRP, transferrine), de l'albumine et de l'alpha-1-antitrypsine. La précipitation des protéines globulaires fait référence à la formation d'agrégats de protéines par l'ajout, par exemple, de sel ou de solvant organique. En revanche, l'immunoprécipitation permet de précipiter sélectivement une protéine donnée par une réaction anticorps-antigène.
Contrôle de la polymérisation
En chimie organique, la néphélométrie est utilisée pour quantifier les macromolécules, par exemple en suivant une réaction de polymérisation.
Pourquoi choisir un néphélomètre BMG LABTECH ?
BMG LABTECH est spécialisé dans la production de lecteurs de microplaques uniquement et apporte plus de 30 ans d'expertise complète dans la technologie de lecteurs de microplaques. Cette connaissance est visible dans les résultats que nos instruments fournissent - le seul facteur qui compte dans votre laboratoire ! Les utilisateurs de BMG LABTECH peuvent avoir confiance pour obtenir les meilleurs résultats en termes de sensibilité, de vitesse et de flexibilité. De plus, nos lecteurs de microplaques multimodes sont développés pour fournir des performances optimales pendant des années. Nos instruments sont développés, produits et testés en Allemagne et sont construits pour être extrêmement robustes et fiables.
Achetez uniquement ce dont vous avez besoin
Grâce à leur modularité, tous nos lecteurs de microplaques peuvent être équipés de différents modes de détection et couvrir une multitude d'applications. Des fonctionnalités supplémentaires peuvent être mises à niveau à tout moment. Vous avez ainsi la possibilité de garder vos options ouvertes, même si vous n'utilisez pas d'emblée toutes les possibilités de votre lecteur de microplaques.
Un service et un support complets
Nous nous efforçons de vous fournir le meilleur service clientèle possible. Tous les représentants des zones de vente sont des spécialistes techniques hautement qualifiés, capables de répondre aux questions relatives au matériel, aux logiciels et à la plupart des applications. Pour les solutions d'applications les plus complexes, une équipe de spécialistes des applications est également disponible.
Logiciels multi-utilisateurs
Tous nos instruments sont livrés avec un logiciel multi-utilisateurs qui peut être installé sur autant d'ordinateurs que les utilisateurs le souhaitent, sans qu'il soit nécessaire d'acheter des licences. Les mises à jour du logiciel de nos lecteurs de microplaques sont gratuites pendant les 12 premiers mois suivant l'achat.